红豆杉细胞微小RNA基因的表达及其对紫杉醇生物合成相关基因调控作用的分析

根据已发现的所有植物微小RNA（microRNA,miRNA）基因的序列设计出探针并制成基因芯片。利用该芯片对紫杉醇生产能力存在明显差异的曼地亚和中国红豆杉的培养细胞中有关微小RNA基因的表达水平进行检测，并对茉莉酸甲酯诱导前后这两种红豆杉细胞中有关微小RNA基因表达变化规律进行分析，结合液质联机对相应细胞中紫杉醇的测定结果及利用生物信息学技术对作用于所有已经克隆的15个紫杉醇生物合成相关基因的miRNA之预测结果，筛选出与紫杉醇生物合成有关的候选miRNA。接着将候选miRNA基因和其靶基因单独和联合转入植物细胞中。最后利用Northern blot和RT-PCR技术对转基因材料中miRNA基因及其靶基因的表达进行分析，以验证有关miRNA基因的功能。旨在揭示miRNA对紫杉醇生物合成调控中所起的重要作用，为今后促进紫杉醇的生物合成，从根本上提高紫杉醇的产量提供科学依据和有效手段。