泛素化蛋白酶体途径在突变蛋白降解致局灶节段性肾小球硬化中作用和机制研究

Focal segmental glomerulosclerosis(FSGS) is one of the leading causes of end-stage renal disease. Mutation of INF2 is one of the important causes of FSGS. Previous studies of our group have found that mutant INF2 proteins were unstable and tended to degradation. Proteasome inhibitor could rescue the increased degradation of mutant INF2. Accelerated mutant protein degradation is mechanism of genetic diseases. So, this project aims to explore the role of ubiquitin-mediated proteasomal pathway in the increased degradation of mutant INF2. We will analyze the protein level of mutant INF2 in vitro and in vivo and investigate the role of ubiquitin-mediated proteasomal pathway in degradating of mutant INF2. Besides we will explore the posibility of increasing the expression of mutant protein and relieving the kidney injury after treatment with proteasome inhibitor in mice with INF2 S85W mutation. Hopefully, it will help to determine the pathogenesis of FSGS with INF2 mutation and to provide a potential new therapeutic target to FSGS.

局灶节段肾小球硬化（FSGS）是终末期肾病的重要病因，基因突变是FSGS重要致病原因之一，但其致病机制复杂。INF2是主要的致病基因之一，本课题前期发现INF2突变可导致INF2蛋白不稳定，应用蛋白酶体抑制剂可减少INF2蛋白降解，而蛋白降解是多种突变致疾病发生的重要机制。因此，本课题拟通过体内和体外实验证实已发现的多种INF2突变蛋白易于降解，通过体外实验探索突变INF2蛋白的泛素化水平变化和泛素化蛋白酶体途径相关因子对突变INF2降解的调控作用，证实泛素化蛋白酶体途径在突变INF2降解作用和机制，并利用S85W点突变小鼠探索蛋白酶体抑制剂对携带S85W突变小鼠的保护作用，最终揭示泛素化蛋白酶体途径在突变INF2蛋白降解的作用和机制，为寻找疾病的新治疗靶点提供理论依据。

INF2是家族性局灶节段性肾小球硬化主要致病基因之一。根据前期筛查发现INF2新的突变位点，因此，本课题组进一步探索INF2的致病机制。本课题组分析FSGS家系和原发性激素抵抗的FSGS患者临床表现，发现两者临床表现相似。对FSGS家系INF2基因进行进一步筛查，发现INF2基因4个致病位点，并初步探讨表型改变。另一方面，本研究发现突变的INF2可致内质网应激及自噬增加，但不影响凋亡，从而影响INF2蛋白的量。对培育的S85W突变的小鼠进行研究，发现基础水平的S85W突变的INF2小鼠并不导致疾病发生，与文献报告的INF2其他突变位点的小鼠模型表型类似。此外，本课题组利用全外显子测序的方法在7个家族性FSGS家系同发现PAX2突变，其中6例为新发现的突变。本研究为家族性FSGS的遗传学筛选及发病机制研究提供一定理论基础。本课题受资助以来，研究工作顺利，完成了初步的预期结果，发表SCI论文1篇，英文综述1片，待发表SCI论文2篇。