结核特异性记忆CD4+T细胞表观遗传调控的研究

CD4+T细胞介导的免疫应答在抗结核免疫中发挥重要作用，而结核特异性记忆CD4+T细胞是发挥长期保护性免疫的主要细胞成份。我们前期的研究结果证实，结核性胸液中CD4+T细胞高表达CD69分子，且结核特异性记忆细胞主要存在于CD4+CD69+T细胞群中。该细胞主要为Th1细胞，分泌Th1型细胞因子并表达IL-12Rβ2和T-bet。近来研究表明，记忆细胞的程序性分化和维持，依赖于分子编码基因转录的表观遗传学调控。因此我们推测，结核特异性记忆CD4+T细胞分化过程中，势必有影响基因转录的DNA甲基化和组蛋白修饰在Th亚群特征性细胞因子基因内重新分布。本项目拟在前期研究基础上，进一步利用MeDIP、ChIP、Real-time PCR 等方法，旨在获得表观遗传参与调控结核特异性记忆CD4+T细胞形成和维持的可靠证据，为了解结核病过程中免疫记忆的形成和调控机制及新型疫苗的研究奠定基础。

适应性免疫应答在抗结核免疫中发挥重要作用，其中结核特异性记忆性细胞介导的细胞免疫是发挥长效应保护性免疫的主要细胞亚群，除了传统的记忆性CD4+ T细胞以外，记忆样NK细胞也发挥着重要作用。我们研究的结果证实，结核性胸液中免疫记忆性CD4+ T细胞主要存在于CD4+CD69+ T细胞群中，且主要为Th1细胞。本课题研究进一步证实，结核性胸液来源的结核特异性记忆CD4+CD69+ T细胞的表型特征主要为CD45RO+CCR7-CD62L-（效应性记忆CD4+ T细胞，TEM）。与外周血单个核细胞相比，CD45RO+CCR7-CD62L-CD4+ T细胞表达较高的Th特异性转录因子T-bet。除了记忆性CD4+ T细胞以外，作为参与固有免疫的NK细胞也具有免疫记忆样细胞的特征，并且在抗结核的适应性免疫应答中发挥重要作用。结果显示，结核特异性抗原刺激后，CD45RO+ NK细胞高表达CD69、CD25和转录因子T-bet，并产生更高水平的IFN-γ。结核性胸水来源的单核细胞自发地产生高水平的炎症因子IFN-α，IFN-α抑制IL-1β的产生同时促进转录因子STAT-1的磷酸化和IFN-γ的产生，参与调控适应性免疫应答，与结核杆菌的易感染性或反复感染密切相关。本研究主要探讨了结核性胸水中记忆性CD4+ T细胞/NK细胞和固有免疫应答的状态，转录因子参与调控多种细胞因子和炎症因子的表达，为了解结核病区域性免疫记忆的形成和调控机制及新型疫苗的研究奠定了基础。