M2b型急性髓细胞白血病的靶向联合治疗机制研究

AML-M2b is the specific subtype of AML (12-15%). It is characterized by t(8;21)(q22;q22) translocation resulting in the AML-ETO oncoprotein. Though traditional chemotherapy can achieve a high complete remission rate but most of the patients will relapse with poor prognosis. In additional to AML1-ETO fusion protein, additional mutations, such as C-KIT, cooperate with this critical leukemogenic role of AML1-ETO, leading to full-blown disease, demonstrating stepwise pathogenesis of AML-M2b. It has been well established now that targeted treatment against oncoproteins which plays a critical role in the pathogenesis of leukemia, could be potentially effective therapy for AML-M2b. Our previous studies demonstrated that Eriocalyxin B selectively causes cleavage of AML-ETO oncoprote and induces apoptosis of t(8;21) leukemia cell lines Kasumi-1 and primary cells isolated from patients. We also found that homoharringtonine could significantly decreases the expression of mutant C-KIT in Kasumi-1.Both of Eriocalyxin B and homoharringtonine could prolong the survival of AML-M2b animal model. In this study, we will further study the molecular mechanism of targeted therapy of Eriocalyxin B and homoharringtonine in treating this kind of leukemia at molecular, cellular, LIC and animal model levels. We will also try to screen the effective combination therapy targeting at muti-moleculars in leukemiagenesis of AML-M2b, which will be significant for improving the treatment and prognosis of this kind of leukemia.

M2b型急性髓性白血病（AML-M2b）伴有t(8;21)和AML1-ETO融合基因，约占急性髓细胞白血病（AML）的12%-15%。目前AML-M2b的治疗以传统化疗为主，虽完全缓解率高，但复发率也高，预后不良。AML-M2b的发病由多步骤参与，除AML1-ETO融合蛋白之外，C-KIT功能获得性突变与之密切相关。现认为靶向针对白血病的关键致病分子是攻克AML-M2b的有效途径。本研究涉及的化合物毛萼乙素可靶向降解致病融合蛋白AML1-ETO，选择性诱导AML-M2b细胞株及病人原代细胞凋亡；高三尖杉酯碱显著降低M2b细胞株表面突变型C-KIT的表达。本研究将进一步在分子、细胞、白血病起始细胞及动物模型等多层面对这两种极有可能成为靶向治疗的候选药物进行更深入的分子机制研究。同时筛选针对发病机制中多个靶点的联合靶向用药治疗方案，对提高AML-M2b的疗效，改善预后具有重要的理论与实践意义。

本课题首先完成了高三尖杉酯碱 （HHT） 治疗伴C-KIT异常的t（8；21）AML的分子机制研究。我们发现，HHT还可以破坏C-KIT蛋白与热休克蛋白Hsp90之间的相互作用，解除Hsp90对于C-KIT蛋白的保护作用，并进一步通过激活蛋白酶体途径降解C-KIT蛋白。同时，以伴C-KIT异常的t（8；21）AML细胞株Kasumi-1和SKNO-1为模型，利用biotin标记HHT，并通过蛋白质谱技术（ESI-Q-TOF）证实HHT可以与NFκB抑制蛋白NKRF结合。HHT进一步促进NKRF和NFκB的结合，抑制NFκB信号通路。HHT对NFκB信号通路的抑制作用进而导致NFκB下游Myc基因的转录活化受限。后者一方面可以通过Sp1/NFκB/HDAC/miR-29b信号回路，在转录水平上引起C-KIT基因表达量下调；另一方面可以阻滞细胞周期于G0/G1期，抑制细胞增殖。其次，我们在Kasumi-1和SKNO-1细胞水平证明了HHT与AML1-ETO（AE）融合蛋白靶向降解药物毛萼乙素（EriB）能协同抑制细胞的增殖、促进AML1-ETO及C-KIT蛋白降解。并且从机制研究揭示了NFκB信号通路是EriB与HHT共同作用的靶点。我们进一步在经典的“二次打击”白血病小鼠模型AE+C-KITN822K白血病小鼠上证明了HHT + EriB联合用药方案能显著抑制小鼠外周血白细胞的增长、延长AE+KITN822K白血病小鼠生存期。在伴C-KIT异常的t（8；21）AML病人原代细胞上也验证了HHT + EriB联合用药降解AML1-ETO及C-KIT蛋白的协同效应。此外，基于EriB抑制NFκB信号通路的作用机制，本课题在EriB治疗免疫性疾病方面的作用机制也进行了一定的探索。发现EriB可以通过阻断JAK/STAT信号通路，抑制CD4+ naïve T细胞向致病性Th1和Th17细胞分化，上调细胞中ROS水平抑制Th17细胞分化和Th1细胞存活，从而早期干预并减轻自身免疫性多发性硬化症模型小鼠的免疫反应，延迟模型小鼠的起病时间，降低其发病率。本研究结果提示了EriB作为自身免疫性疾病候选新型药物开发的良好前景。.本课题实施以来，已发表SCI论文1篇（IF=9.809，第一标注），获得国内发明专利授权1项。