Notch-1通路调控胃癌侵袭转移及与细胞骨架重构的相关性研究

我们前期研究发现过度活化Notch-1通路抑制胃癌BGC-823细胞凋亡，但Notch-1通路调控与胃癌侵袭转移的相关性研究尚未见报道。本项目将采用反病毒载体转染及RNA干扰技术调节不同侵袭潜能胃癌细胞的Notch-1通路活性或细胞骨架重构相关蛋白Fascin-1与F-actin的表达，明确其对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和黏附及Notch-1通路与细胞骨架重构相互关系的影响；探讨胃粘膜不同病变及转移淋巴结组织和不同侵袭潜能胃癌细胞中的Notch-1、Fascin-1与F-actin的表达、异常甲基化和基因突变规律；采用免疫双标、免疫共沉淀及GST pull-down等技术检测胃癌组织和细胞中Notch-1通路与Fascin-1及F-actin的相互作用方式。将从理论上揭示Notch-1通路调控胃癌侵袭转移的机制，为找寻阻断胃癌侵袭转移的靶点，和胃癌基因诊断及治疗提供新思路、开辟新途径。

目的和方法：本项目致力于阐明Notch-1调控细胞骨架重构相关蛋白的分子机制及其对胃癌癌侵袭转移的作用，目前已圆满完成了预期目标，并适当扩展。我们应用Real-time PCR、免疫组织化学及Western Blot等方法，检测了人胃癌、正常胃黏膜组织标本及胃癌细胞株中Notch-1、NICD及Hes1等靶基因及细胞骨架重构相关蛋白Fascin-1、F-actin在mRNA及蛋白水平的表达情况；阐明了其对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭及Notch-1 通路与细胞骨架重构相互关系的影响。结果：在本研究中，我们发现胃癌中Notch-1、Hes1在mRNA和蛋白水平均升高；Fascin-1、F-actin在mRNA和蛋白水平在胃癌中均升高，表明胃癌中Notch-1和Fascin-1/F-actin通路被激活，提示该两条信号通路在胃癌的发生发展中亦起促癌作用；下调胃癌细胞的Notch-1 通路活性或细胞骨架重构相关蛋白Fascin-1与F-actin 的表达，胃癌细胞均出现不同程度的细胞增殖抑制、凋亡升高、细胞侵袭抑制；然而，这两条通路并未发现存在直接的相互作用。结论：这些研究结果表明，胃癌的侵袭转移和Notch-1及Fascin-1/F-actin通路的活化存在着一定的相关性。