循环Tfh细胞在重症肌无力复发、缓解中的机制探讨

Myasthenia gravis (MG) is an autoimmune disease in which the exact pathogenesis is obscure. The traditional accepted idea is that thymus is the part that triggering the onset of MG. Recently, evidences support the important role of humoral immunity in MG pathogenesis. However,the regulatory mechanism of the B-cell activation which producing antibodies is not fully understood. T follicular helper (Tfh) cells are the effector cells of B-cell activation,and play a central role in the activation of B cells,the formation of germinal center (GC) and the production of high-affinity antibodies. It has been demonstrated that CD4+CXCR5+ T cells in the peripheral blood posses a similar phenotype and function with GC-Tfh cells. In our recent study and literature from pubmed in 2013, a significant increase of circulating CD4+CXCR5+ T cells has been observed compared with healthy controls, but whether this population of cells play a role in MG patients' clinical symptoms with recurrent or exacerbation status has not been report. In this study, we are planning to collect the circulating Tfh cells during recurrent or remitting period of MG patients by utilizing immunomagnetic beads and flow cytometry (FACS), evaluate the expression of the specific surface molecules, and explore the correlation between circulating Tfh cells and the severity of disease. We are trying to test the potential role of circulating Tfh cells in inducing B-cell activation. Moreover, we are still trying to investigate whether the transferred circulating Tfh cells from the mice with experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) affect the onset of EAMG and the severity of disease in the normal mice immunized. This would provide a novel therapeutic strategy for MG.

重症肌无力（MG）作为自身免疫性疾病，确切发病机制尚不明了。传统观点认为胸腺是MG发病的始动部位，新近证据支持体液免疫在MG发病中具有重要作用，但B细胞活化产生抗体的调控机制尚不完全清楚。 辅助B细胞活化的主要效应细胞是滤泡辅助性T细胞（Tfh）。在B细胞活化、生发中心形成及高亲和力抗体产生中发挥核心作用。研究表明外周血CD4+CXCR5+T细胞具有与Tfh相似的表型和功能，称为循环Tfh，可间接反映Tfh的功能状态。我们前期研究及2013年文献报道均发现MG患者外周血CD4+CXCR5+T细胞比例明显高于健康对照组，但该群细胞是否在MG患者复发加重的临床症状中发挥作用尚无报道。 本项目采用免疫磁珠+流式细胞分选MG不同病程阶段的循环Tfh，分析其表面分子表达情况及与疾病严重性的相关性；体外细胞培养验证其对B细胞的活化作用；观察过继转移循环Tfh对EAMG症状的影响，为MG治疗提供新的靶点

重症肌无力（MG）作为自身免疫性疾病，确切发病机制尚不明了。传统观点认为胸腺是 MG 发病的始动部位，新近证据支持体液免疫在 MG 发病中具有重要作用，但 B 细胞活化产生抗体的调控机制尚不完全清楚。辅助 B 细胞活化的主要效应细胞是滤泡辅助性T 细胞（Tfh）。在 B 细胞活化、生发中心形成及高亲和力抗体产生中发挥核心作用。研究表明外周血CD4+CXCR5+T 细胞具有与Tfh相似的表型和功能，称为循环 Tfh，可间接反映Tfh 的功能状态。我们前期研究及 2013 年文献报道均发现MG 患者外周血 CD4+CXCR5+T 细胞比例明显高于健康对照组，但该群细胞是否在 MG 患者复发加重的临床症状中发挥作用尚无报道。.通过免疫磁珠+流式细胞分选MG不同病程阶段的循环 Tfh，结果发现：病情稳定时CD4+CXCR5+细胞明显减少，而活动期或加重时CD4+CXCR5+细胞明显表达增加，进一步统计分析发现：CD4+CXCR5+细胞表达与QMGs分数有明显相关性，表明Tfh细胞表达水平与MG疾病严重性相关。.进行循环Tfh细胞-B 细胞体外共培养实验，结果发现：活动期CD4+CXCR5+细胞对B细胞有明显的活化，活动期CD4+CXCR5+细胞刺激后浆细胞明显表达增加，而初始B细胞与祖细胞明显减少，提示可能存在循环Tfh 细胞刺激B 细胞产生抗体。.按国际标准建立国际公认的主动免疫MG动物模型，发现实验组模型小鼠血Tfh细胞水平与淋巴结Tfh细胞水平明显高于对照组，而在胸腺的表达，则无明显统计学意义。接着，分离纯化细胞，进行细胞培养及体外细胞增殖实验：检测CD4+CXCR5+细胞CCR6+的水平在组间有明显的统计学差异，以MG患者、EAMG小鼠表达明显高于对照组，而EAMG小鼠胸腺表达未见明显升高，提示Th17可能在MG发病中有一定的作用。.其后，过继实验结果发现：Tfh细胞过继后的对照组小鼠未见明显的MG症状，但EAMG小鼠过继实验后，QMGs明显高于未予注射组，且EAMG未成功组小鼠在予以过继实验后，均出现MG症状，提示Tfh细胞在MG发病中有一定的推动作用，而不是主导作用。.本研究探讨MG 患者循环 Tfh 细胞与疾病严重性之间存在相关性，具有辅助初始 B细胞的活化和增殖的作用，有望为阐明 MG 免疫学发病及调控机制提供新的见解。