滤泡辅助性T（TFH）细胞在原发性胆汁性肝硬化中的作用和机制探讨

Primary biliary cirrhosis (PBC) is an autoimmune-mediated chronic cholestatic liver disease, its incidence rates are increasing in time and it lack effective therapy as well, the imbalance of immunoregulation and defects of immune tolerance as key factors contribute to disease progression. T follicular helper cells (TFH cells) as a new important subset of T cells in lymphoid follicle , provides a helper function to B cells. Dysregulation of TFH cells function, and over- or under-expression of TFH cell–associated molecules most likely contributes to the pathogenesis of certain autoimmune diseases or immunodeficiencies. However, the mechanisms of TFH cells in the pathogenesis and response to drug treatment in the PBC remain poorly understood. In this study, we aim to detect the circulating TFH cells subsets distribution, phenotype and function characteristics and potential mechanisms of TFH-mediated B cells activation and regulation in PBC patients with different disease stages, PBC patients responders and non-responders with ursodeoxycholic acid(UDCA) treatment before and after the UDCA treatment respectively. This study will find out TFH cells related immune indicators for monitoring PBC disease progression and explore the potential mechanisms of TFH cell-mediated immunity which will affect the response to UDCA treatment in PBC patients and look for novel targets based on TFH cells associated immune control and therapeutic strategy.

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一类自身免疫性慢性胆汁淤积性肝病，发病率逐年升高，治疗上也缺乏有效手段，患者免疫调节机制的失衡和自身免疫耐受的缺陷是该病进展和持续的重要因素。滤泡辅助性T细胞（TFH）作为一类定位于淋巴滤泡、具有辅助B细胞功能的新型CD4+辅助性T细胞亚群，其细胞比例及其相关分子的数量和(或)功能异常与多种抗体介导的自身免疫性疾病的发生密切相关。但TFH细胞在PBC中的发病及药物治疗应答中的作用机制尚未明确。本项目旨在通过研究PBC不同疾病阶段以及采用熊去氧胆酸（UDCA）治疗应答者与无应答者治疗前后外周血TFH细胞的亚群分布、表型、免疫功能特征及其介导的B细胞活化的潜在机制，挖掘出监测疾病进展的与患者自身免疫状态密切关联的外周血TFH细胞相关免疫指标，并探索外周血TFH细胞介导的影响UDCA治疗应答效果的免疫控制因素和发生机制，为探索PBC新型免疫治疗策略提供靶点和思路。

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一类自身免疫性慢性胆汁淤积性肝病，发病机制复杂，至今仍未阐明，且目前临床尚缺乏PBC诊断理想的分子标志物以及监测PBC疾病进展的有效指标。滤泡辅助性T细胞（Tfh）能够辅助生发中心B细胞产生抗体，该功能可被滤泡调节性T细胞（Tfr）抑制。本课题研究表明PBC患者相对于健康者循环Tfh细胞比例显著升高，Tfr细胞比例下降，Tfr/Tfh比值显著降低。PBC患者未服用熊去氧胆酸（UDCA）相对于服用者，PBC患者服用UDCA药物无应答者相对于应答者，PBC肝硬化者相对于未发生肝硬化者存在Tfr比例降低，Tfr/Tfh比值降低的现象，并且Tfr/Tfh比值与PBC重要指标免疫球蛋白IgM呈负相关。Tfr/Tfh比值的降低提示PBC患者更严重疾病进展、以及用药后不良应答，可作为良好的监测PBC疾病进展和药物疗效免疫学指标。环状RNA（circRNA）是一类具有调控基因表达作用的特殊的内源性非编码RNA，目前国内外尚无circRNA在PBC发病中作用的研究报道。本项目通过对PBC患者以及健康对照者外周血circRNA的表达谱芯片分析，挖掘并验证出 has_circ_402458在芯片结果，大量血浆样本的表达均在PBC患者中显著升高，并且与疾病进展和药物治疗有一定的关联性，同时又具备良好的敏感性和特异性，可作为理想的PBC疾病诊断的新型分子标志物。此外结合生物信息学方法以及前期工作基础，我们预测hsa_circ_0087631可能通过调控靶miRNA miR-346从而调控下游基因Bcl-6的表达来影响Tfh细胞功能。我们在293T细胞和Jurkat细胞中已经证实miR-346与hsa_circ_0087631存在互相调控作用。本项目的完成揭示了Tfr细胞分化不足、Tfh数量增多及Tfr/Tfh比值失衡可能参与了PBC自身免疫发病机制并且发现了新型PBC诊断分子标志物，并探究影响Tfh细胞功能相关circRNA分子在PBC疾病进展中的潜在作用和机制，为探索PBC新型治疗策略提供靶点和思路。本项目共发表SCI论文4篇，其中IF>5的SCI论文1篇，中文核心期刊论文1篇。本项目协助培养研究生3名。课题组成员参加2次国内学术会议，课题相关内容发表了1次会议论文，1次壁报展示，较好地将研究成果进行了推广。