核仁小分子RNA-ACA11在t(4;14)MM发生及进展中的作用研究

Multiple myeloma (MM) with t(4;14) high express of MMSET protein, were resistant to chemotherapy and tend to progress. However, the mechanism of this is unknown. It’s reported that the MM patients and cell-lines with t(4;14), high express small nucleolar RNAs (snoRNAs )-ACA11, which let the MM cells get proliferation and get resistance to cytotoxic drugs. Also, the molecular mechanism of the snoRNAs is unclear. Our preliminary study has shown that ACA11 is high expressed in MM patients with t(4;14) and more higher expressed in the MM patients with high ISS stage(Ⅱ or Ⅲ). Compared with the newly diagnosed, the MM patients with t(4;14) at relapsed or progressed stage have a higher expression of ACA11，and the MMSET do not regulate the expression directly. The newest research showed that the snoRNAs had a mimic function of microRNAs. So we hypothesis that ACA11 may regulate the target gene specifically, and play an important role in the evolution and development of MM. In order to explore the role of ACA11 in the evolution and development of MM with t(4;14), here we will verify the target gene of ACA11, and verify the mechanism of how ACA11 regulate its target gene and affect the proliferation and resistant to chemotherapy of MM cells.

t(4;14)多发性骨髓瘤（MM）高表达MMSET蛋白，对化疗不敏感，易进展，其机制尚未明确。有研究显示t(4;14)MM中，存在一种核仁小分子RNA(small nucleolar RNAs, snoRNAs))- ACA11高表达，使MM细胞增殖，但其分子机制未明确。我们前期研究显示不仅t(4;14)MM患者ACA11高表达，且ISS分期Ⅱ或Ⅲ期的患者的ACA11表达水平更高，复发及疾病进展t(4;14)MM患者较初治时表达增多，MMSET没有直接调控ACA11表达的作用。最近研究证实snoRNAs具有microRNAs样的功能，因此，我们推测ACA11特异性调控靶基因，参与骨髓瘤的发生与发展。我们拟通过生物信息学技术，首先预测ACA11作用的靶基因，对靶基因进行验证，然后验证ACA11通过调控其靶基因而影响MM细胞增殖、侵袭能力，探讨ACA11在t(4;14)MM发生及发展中的作用。

t(4;14)的MM患者预后差，对化疗药物不敏感，易复发，生存期短，临床上为高危组。我们前期研究显示t(4;14)MM的核仁小分子RNA(snoRNAs))- ACA11高表达，使MM细胞增殖，但其分子机制未明确。有研究证实snoRNAs具有microRNAs样的功能，因此，我们推测ACA11特异性调控靶基因，参与MM的发生与发展。.采用生物信息学预测ACA11的靶基因为视网膜母细胞瘤基因1（Rb1）和细胞周期蛋白D2（Cyclin D2）；检测t(4;14)MM患者Rb总蛋白、Rb1磷酸化蛋白及Cyclin D2蛋白水平，发现ACA11高表达患者，其Rb1总蛋白、Rb1磷酸化蛋白降低，而Cyclin D2蛋白表达水平增多，初步表明ACA11与Rb1和Cyclin D的相关性；通过构建ACA11过表达质粒和低表达质粒，ACA11过表达后，Rb1、Cyclin D2、SERPIND1、C20orf144和SETDB2的mRNA及蛋白表达异常，其中Cyclin D2、SERPIND1是增高的，Rb1、C20orf144和SETDB2降低；低表达ACA11质粒也验证了这一结果。表明ACA11通过靶向这些基因起作用。.Transwell小室法检测ACA11过表达MM1S细胞系和使用shRNA下调ACA11表达的t(4;14)KMS11细胞系的侵袭能力；使用细胞毒性药物阿霉素作用ACA11过表达MM1S细胞系和使用shRNA下调ACA11表达的细胞系KMS11，正反向结果显示ACA11过表达增加细胞的侵袭力并对阿霉素产生耐药。裸鼠成瘤实验也证实ACA11可以引起肿瘤。同步检测Rb1、Cyclin D2、SERPIND1、C20orf144和SETDB2基因。表明ACA11通过调控靶基因增加肿瘤的侵袭力、参与耐药及肿瘤的发生。.临床收集t(4;14）MM 患者样本83例，根据ISS分期，与Ⅰ期患者比较，Ⅱ或Ⅲ期患者的ACA11表达更高；复发/难治 t(4;14)MM患者较初治表达增多。同步检测Rb1、Cyclin D2、SERPIND1、C20orf144和SETDB2基因。表明ACA11通过调控靶基因参与疾病的发生、发展。.项目研究表明ACA11靶向多个基因，参与t(4;14）MM 的发生及发展，为靶向治疗(4;14）MM提供理论依据。