miR-27a-3p抑制闭塞性细支气管炎的作用及机制研究

Obliterative bronchiolitis (OB) affects most long-term survivors of lung transplantation. The mechanisms of OB include the tissue fibrosis and immune rejection. The previous research found miR-27a-3p could target TGFβ/Smad pathway to block fibrosis and miR-27a-3p transfected dendritic cell could induced immune tolerance. MiR-27a-3p might inhibit OB by its effect of both pathway. We prepared to use Luciferase assay to detect miR-27a-3p target, Overexpression and knockdown of miR-27a-3p to investigate the effect and mechanism of miR-27a-3p regulation of TGF-beta/Smad signaling pathway blocking fibrosis on OB in vivo and in vitro. We use miR-27a-3p-transfected dendritic cell to investigate the effect miR-27a-3p inducing tolerance. Finally, we would make clear the role of miR-27a-3p in OB and improve the treatment strategy of OB, provide a new idea for improving the prognosis of lung transplantation.

闭塞性细支气管炎（OB）是影响肺移植术后长期生存的主因，其机制涉及组织纤维化和免疫排斥两方面，目前尚无有效治疗方案。课题组前期通过microarray技术发现miR-27a-3p靶向TGFβ/Smad信号通路，抑制纤维化；同时miR-27a-3p转染树突状细胞抑制IL-17+CD4+T细胞分化，促进Foxp3+CD4+Treg的积累，诱导免疫耐受，具有“一靶双效”的作用。本课题作为前期研究的延续，通过体内体外实验，应用荧光素酶验证miR-27a-3p调控靶点；RNA原位杂交，Real-time PCR, western blot检测miR-27a-3p的表达及抑制纤维化作用；利用小鼠原位气管移植动物模型研究miR-27a-3p转染树突状细胞后诱导免疫耐受的作用及机制，探讨miR-27a-3p“一靶双效”阻断纤维化、诱导免疫耐受抑制OB的作用及机制。完善OB的治疗策略，为其临床应用奠定基础。

闭塞性细支气管炎（OB）是制约肺移植术后长期生存的主要因素。防治OB所使用的免疫抑制剂造成感染、肿瘤等继发疾病严重影响了OB的治疗效果。我们的前期研究显示，mir-27a-3p可能参与到OB的发生发展过程中，是一种OB的负相调节因子。本研究利用小鼠纤维母细胞、小鼠骨髓来源树突状细胞（DCs）和小鼠原位气管移植模型，对mir-27a-3p多靶点抑制OB的作用和机制进行了探讨。结果显示，mir-27a-3p靶向α-SMA，SMAD2，SMAD4抑制TGFβ/SMAD信号通路从而抑制OB气道纤维化的病理过程；同时，mir-27a-3p可以靶向Sprouty2，间接激活ERK，分泌IL-10，激活IL-10/JAK/STAT3信号通路，抑制DCs成熟，促进Treg增殖和IL-10分泌，形成正反馈调节，诱导免疫耐受，抑制OB的进展；气道上皮间质转化（EMT）在OB的发展和肿瘤进展中均发挥重要作用，Mir-27a-3p靶向SMAD3抑制EMT，从而发挥抑制OB及抑制肿瘤的双优作用。本研究探索了mir-27a-3p防治OB的作用及机制，为临床防治OB及相关继发疾病，改善肺移植预后，提供了潜在的干预靶点及理论基础。