17β-氨基-雄/雌甾烯酮/醇-RGD肽缀合物：一类口服活性强毒副作用弱的潜在抗骨质疏松剂

我国有1亿人患骨质疏松。本项目研究抗骨质疏松新药，科学支撑是a)破骨细胞黏附在骨质疏松病理中至关重要; b)RGD序列在破骨细胞黏附中至关重要; c)可预防骨质疏松的雌激素替代治疗有子宫内膜增生和血栓形成副作用; d)雌激素-RGD肽缀物注射抗骨质疏松活性强、无子宫内膜增生副作用血栓形成副作用不明确; e)申请人已制得三种新甾体，它们的抗骨质疏松活性比雌激素强、无子宫内膜增生副作用、无血栓形成副作用。本项目 a) 把这三种新甾体与RGD四肽及八肽共价键偶联，制备27种新缀合物; b) 用骨质疏松小鼠（通过股骨重、股骨灰重、血钙、骨钙、骨磷、骨矿密度）评价治疗作用；c）用骨质疏松小鼠的子宫重量和健康小鼠凝血时间评价副作用。本项目预期可找到抗骨质疏活性比雌激素及雌激素-RGD肽缀合物强、无子宫内膜增生副作用、无血栓形成副作用和可口服给药的新缀合物，为雌激素替代治疗提供候选药物。

RGD序列在破骨细胞黏附中至关重要；破骨细胞黏附在骨质疏松病理中至关重要；但可预防骨质疏松的雌激素替代治疗具有子宫内膜增生和血栓形成的副作用。依据所述骨质疏松机理和临床问题，本项目选择具有自主知识产权的3种新甾体，它们虽然抗骨质疏松略强于雌激素，但是，它们完全没有雌激素造成子宫内膜增生和形成血栓的副作用。.根据药物化学拼合原理，本项目将具有抗骨质疏松作用的新甾体与在骨质疏松病理中具有至关重要的含RGD序列的多肽用共价键偶联，形成甾体-多肽缀合激素，达到既增效甾体抗骨质疏松作用的目的，又克服子宫内膜增生和血栓形成的副作用，并希望本项目设计的化合物可以形成纳米，达到口服给药方便，nmol级给药低副作用或消除副作用的目的。.本项目设计了27个目的化合物，并经过9条合成路线制备了27种新甾体-RGD四肽、新甾体-RGDX-RGDX八肽缀合物。以HPLC确认了合成的27种目标化合物的纯度均达98%以上，以MS、1HNMR、13CNMR和元素分析等确认了27种目标化合物结构正确，并以TEM、SEM和AFM测定了27个目标化合物经自组装形成纳米。.本项目选择7周龄小鼠去势造成骨质疏松症，随机分组，每组12只，即卵巢切除组(OVX)、假手术组（sham）和RGD肽治疗组7组、甾体1/3/5治疗组3组、27个缀合物治疗组共27组。结扎去势后第5天口服给予上述药物，连续给药4周。称量体重、眼球取血、牺牲动物。制备血清，用原子吸收分光光度法测定了血钙含量，用钼蓝法测定了血磷含量，用磷酸苯二钠为底物测定了碱性磷酸酶（ALP）的含量。分离小鼠肺、肝、脾和子宫并称重。分离小鼠股骨，用双能X射线骨密度仪测量了骨小梁的骨矿密度（BMD）。称量股骨干重、灰重，得灰重与股骨干重比值（g/g），得到了骨矿含量（BMC）。测定了骨钙、骨磷、骨小梁的骨矿密度。实验结果显示，本项目的目标化合物在口服nmol/kg给药剂量下具有优于临床用雌激素的抗骨质疏松作用。.本项目在大鼠 动静脉旁路插管模型上观察了27种目标化合物血栓形成情况，结果显示，27种目标化合物在口服给药抗骨质疏松剂量下不具有血栓形成问题。.综上所述，本项目完成了任务书规定的合成、活性评价、血栓形成副作用观察实验，结果显示，我们找到了口服给药方便、给药剂量低、抗骨质疏松作用强、没有子宫内膜增生和血栓形成的副作用的优秀的抗骨质疏松纳米化合物