PHTF1基因与BCL11B调控T细胞的相关性研究

BCL11B基因（B-cell chronic lymphocytic leukaemia (CLL)/lymphoma11B）异常表达与人类T细胞肿瘤发生密切相关。我们的前期研究发现BCL11B-siRNA（小干扰RNA）可以诱导白血病T细胞株发生凋亡，并通过基因表达谱分析发现其作用相关的PHTF1（putative homeodomain transcription factor 1）基因上调16倍。本研究利用基因转染和RNA干扰技术将人PHTF1重组质粒和shRNA（短发夹RNA）分别转导至白血病及正常人外周血T细胞中，通过BCL11B基因和蛋白定量分析、T细胞体外增殖实验、TCRαβ基因谱系分析、细胞凋亡和周期检测等；试图首先明确PHTF1与BCL11B调控T细胞的相关性，同时了解PHTF1－FEM1b－Apaf-1通路在调控T细胞凋亡中的作用，为T细胞肿瘤靶向治疗提供新策略。

前期研究发现，BCL11B与PHTF1基因可能共同参与调控肿瘤T细胞株的凋亡；本研究进一步探讨其可能的作用机制。通过检测不同类型白血病患者及正常人外周血PHTF1、FEM1b和Apaf1基因的表达水平，本研究首次发现PHTF1基因在3种血液肿瘤中高表达（AML、CML-CP、ALL），在正常人中，与BCL11B基因的表达呈正相关，揭示PHTF1基因可能是一种抑癌基因；进一步分析ALL中以上基因，首次发现FEM1b、Apaf1基因均高表达，并与PHTF1基因的表达呈正相关；结合FEM1b是PHTF1作用的靶基因，与Apaf-1相互作用调控凋亡，推测FEM1b、Apaf1基因可能是PHTF1基因的下游通路基因，共同调控细胞凋亡。同时，本研究首先报道了PHTF1-FEM1b-Apaf1通路基因在脐血CD34+细胞和单个核细胞中的表达特点，进一步证实BCL11B-siRNA935处理对CD34+细胞BCL11B相关基因表达影响不明显，为BCL11B-siRNA抗T-ALL应用的安全性提供了新资料。通过分别上调和下调肿瘤T细胞株（Molt-4、Jurkat）中PHTF1基因的表达，发现上调状态下，BCL11B基因表达进一步降低，FEM1b、Apaf1基因均上调；72h出现抑制Jurkat细胞增殖、促进Molt-4细胞凋亡，细胞周期分析提示G2/M期细胞比例增加，揭示肿瘤细胞阻滞在DNA合成分裂期或凋亡；经RNA测序分析，进一步揭示了PHTF1基因上调后抑制肿瘤细胞增殖的相关机制，证实PHTF1-FEM1b-Apaf1通路激活与促进凋亡相关。下调正常人外周血T细胞中PHTF1基因的表达，对BCL11B、FEM1b、Apaf1基因的表达以及T细胞的增殖、凋亡并无显著影响；但未能上调T细胞中PHTF1基因的表达。本项目已发表SCI收录论著2篇，英文特约综述1篇，国家级会议论文1篇，应邀参加中德科学中心资助的第一届中德血液学研讨会并大会报告。本项目参与培养一名博士研究生。由于BCL11B作用的靶基因和其调控T细胞凋亡的具体机制尚未完全明确，本研究通过深入了解PHTF1基因的表达特点、生物学功能，及PHTF1－FEM1b－Apaf-1通路在调控肿瘤T细胞凋亡中的作用；为进一步思考联合靶向抗T-ALL的目的基因提供新资料，对于血液系统肿瘤的靶向免疫治疗研究具有重要的意义。