绵羊肺腺瘤病毒env与透明质酸酶-2受体相互作用研究

绵羊肺腺瘤病毒（JSRV）的"囊膜蛋白(env)"基因是致病过程中的重要致癌基因，透明质酸酶-2（Hyal-2）"是JSRV的受体。为了探索JSRV与其受体相互作用之后靶细胞的癌变机制，本课题在以往研究的基础上，制备JSRV囊膜假病毒，再建立稳定表达绵羊Hyal-2受体的细胞系，通过二者的相互作用，进一步回答JSRV env转化绵羊易感细胞时是否与Hyal-2受体相互作用而引起靶细胞的癌变，有没有其他相关的细胞受体或辅受体；引起靶细胞异常转化和增生时，相关细胞因子的表达发生了什么样的变化，进而分析靶细胞相关细胞因子的表达与SPA肿瘤发生间的关联性。本研究为JSRV的体外培养及揭示JSRV致瘤机理的深入研究提供有效的工具，为进一步研制阻断病毒感染的药物及疫苗提供崭新的思路。

本课题研究重点是绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的“囊膜蛋白(Env)”与其受体绵羊透明质酸酶-2（Hyal-2）的相互作用，以及之后导致靶细胞发生转化癌变的分子机制。我们在以往研究基础上完成了以下工作：绵羊Hyal-2基因的克隆及序列分析；并对绵羊Hyal-2蛋白结构进行预测分析；绵羊Hyal-2真核表达载体的构建及在293T细胞中表达；绵羊Hyal-2原核表达载体的构建并诱导表达及Hyal-2多克隆抗体的制备；稳定表达JSRV受体Hyal-2的小鼠肺上皮细胞系的建立；含绿色荧光蛋白标记的外源性JSRV-Env真核表达载体的构建及其表达；含绿色荧光蛋白标记JSRV-Env的Su及Tm亚基真核表达载体的构建及表达产物鉴定；外源性JSRV-Env原核表达载体的构建；外源性JSRV-Env及其Su和Tm亚基与Hyal-2受体相互作用时可能结合区域的研究；外源性JSRV-Env的SU亚基与Hyal-2可能结合区域的初探；pEGFP-C1-（env、su、tm）与pDsRed-monomer-N1-Hyal-2共转小鼠NIH3T3细胞后对pik3ca、ras基因表达量变化的影响；外源性JSRV-Env与TC-1-pDsRed-Hyal-2细胞和NIH 3T3细胞作用过程中肿瘤相关基因突变的影响及相关细胞因子的表达与动态变化。本课题可为揭示JSRV致瘤机制及实现JSRV的体外培养提供有效的思路和方法。