JSRV囊膜假病毒诱导肺上皮细胞癌变的信号转导机制研究

Jaagsiekte retrovirus (JSRV) envelope protein (Env) is important cancer-causing protein in lung epithelial cells. In order to explore the mechanisms of signal transduction for the lung epithelial cells canceration induced by Env binding with its receptor, and on the basis of previous studies, this task will prepare JSRV envelope pseudovirus which has infectious, and then constructed Env induced pulmonary adenocarcinoma cell model in vitro. testing expression changes of phosphatidylinositol 3 - kinase, mitogen-activated protein kinases and telomerase in cell signal transduction pathways After virus infection of susceptible cells. Further answer whether JSRV envelope protein is the interaction with its receptor, and then Cancer-caused target cells? Expression of a key enzyme in the target cell signal transduction pathways have any rules can be found. On this basis, to build the infection model in mice and in sheep used the JSRV envelope pseudovirus, further analysis the signal transduction mechanisms of Env oncogenic in animals, and then analyzed the correlation between this mechanism and tumorigenesis. This project will lay the foundation for in-depth studies of the molecular pathogenesis by infect tumor viruses, as well as to provide an initial theoretical foundation to build the variant placeholder protein by blocking the signal transduction pathway.

绵羊肺腺瘤病毒（JSRV）的囊膜蛋白(Env)在诱导肺上皮细胞癌变过程中起重要作用。为了探索Env与其受体结合后诱导肺上皮细胞癌变的信号转导机制，本课题拟在以往的研究基础上，制备具有感染性的JSRV囊膜假病毒，之后构建体外Env致肺腺癌细胞模型，检测病毒感染易感细胞后，细胞信号转导通路上的磷酯酰肌醇3-激酶、丝裂原活化蛋白激酶、端粒酶的表达。进一步回答JSRV的囊膜蛋白是否与受体相互作用而引起靶细胞的癌变？靶细胞信号转导通路上的关键酶的表达变化有没有规律可寻。在此基础上构建JSRV囊膜假病毒的小鼠感染模型和绵羊感染模型，在动物体内进一步分析Env致瘤的信号传导机制，进而分析该机制与肿瘤发生间的关联性。本课题为深入研究肿瘤病毒的分子致病机制奠定基础，同时为通过阻断传导通路而构建的变异型占位蛋白的研究提供前期理论基础。

研究证明绵羊肺腺瘤病毒（JSRV）的囊膜蛋白(Env)在诱导肺上皮细胞癌变过程中起主导作用。为探索 Env诱导肺上皮细胞癌变的信号转导机制，本课题在以往的研究基础上完成了以下工作：对内蒙古呼伦贝尔市部分地区绵羊进行肺腺瘤病病理学筛查，并初步认定我国内蒙古呼伦贝尔部分地区存在绵羊肺腺瘤病；成功构建了稳定表达JSRV受体绵羊Hyal-2蛋白的体外传代细胞系TC-1-Hyal2细胞；实现了外源性JSRV Env的体外表达；使用JSRV Env分别转染NIH 3T3细胞、TC-1细胞和TC-1-Hyal2细胞；检测了JSRV Env对细胞信号通路中关键酶以及对体外细胞生长因子表达的影响，进一步探索JSRV的囊膜蛋白引起靶细胞的癌变过程中，靶细胞信号转导通路上的关键酶的表达变化规律，分析Env 致瘤的信号传导机制与肿瘤发生间的关联性。结果表明，转染细胞p-Akt（S473）、p-Akt（T308）、p-Erk和TERT表达量与对照组相比显著升高，且TC-1-Hyal2细胞与TC-1细胞相比较p-Akt（T308）、p-Erk及TERT升高的更显著，说明绵羊Hyal-2具有促进JSRV Env诱导TC-1细胞转化的作用。经pEGFP-C1-env转染处理的3种细胞中VEGF和TGF-α因子表达量均显著升高；EGFR因子在转染pEGFP-C1-env的NIH 3T3细胞中显示表达量增高，NIH 3T3细胞中VEGF、EGFR同时显示过表达，提示二者在JSRV-Env转染后的体外细胞或OPA肿瘤中存在正相关性，以及在肿瘤发生过程中二者可共同发挥一定的促进作用。此结果说明JSRV Env能上调上述细胞因子的表达，由此得知它们与OPA疾病发生存在一定关联性。本课题为深入研究肿瘤病毒的分子致病机制奠定基础，同时为通过阻断传导通路而构建的变异型占位蛋白的研究提供前期理论基础。