PP2A促进直肠癌细胞非整倍体核型异质性及侵袭转移能力的信号机制研究

近期我们在直肠癌复发转移的蛋白质组学研究中发现肿瘤非整倍体核型异质性与侵袭异质性间存在关联分子，PP2A可能是关联分子之一。临床病理研究表明，PP2A表达与直肠肿瘤的侵袭、淋巴结及远隔转移、TNM分期相关；PP2A作为细胞分裂增殖和分化信号传导MAPK通路关键酶，在直肠癌细胞非整倍体形成及转移中的作用值得深入研究。我们拟用RNA干扰及基因过表达技术进一步确定PP2A在直肠癌细胞非整倍体形成及转移中的作用；应用免疫共沉淀及相关蛋白质组学技术研究PP2A与纺锤体监测点蛋白的相互作用，观测PP2A对纺锤体监测点蛋白功能调控及其对直肠癌细胞染色体不对称分离的影响，以及PP2A在非整倍体核型异质性形成中的作用；应用细胞学实验研究PP2A对直肠癌细胞生物学行为的影响。揭示PP2A在蛋白水平参与直肠癌细胞调控的相关信号分子，阐明PP2A及其相关信号通路在直肠癌非整倍体形成及侵袭转移中的作用及其机制。

临床病理研究表明，PP2A表达与直肠肿瘤的侵袭、淋巴结及远隔转移、TNM分期相关，PP2A是细胞分裂增殖和分化信号传导MAPK通路关键酶。我们用RNA干扰及基因过表达技术进一步确定PP2A在直肠癌细胞非整倍体形成及转移中的作用,探讨RNA干扰PP2A-Aα基因表达对结直肠癌细胞生物学行为的影响。.方法：设计了3条shRNA干扰载体并分别稳定的转染结直肠癌SW480细胞。RT-PCR方法筛选出一组干扰效率最高的转染细胞进行进一步实验。应用MTT法检测干扰后结直肠癌细胞的增殖能力，应用Transwell实验检测干扰后结直肠癌细胞的运动侵袭能力。应用双色荧光原位杂交试验进行细胞核染色体倍体分析。.结果：转染pS-shRNA599干扰载体的SW480细胞PP2A-Aα基因表达明显降低,抑制率达72.8%。应用MTT法检测干扰后结直肠癌细胞的增殖能力明显增强(P<0.01)；Transwell实验显示,干扰组细胞的穿膜细胞数明显多于对照组细胞(P<0.01)。转染pS-shRNA599干扰载体的结直肠癌细胞染色体非整倍体发生率明显增高。.结论：PP2A基因表达降低可明显提高结直肠癌细胞的增殖能力与运动侵袭能力,PP2A表达下调的结直肠癌细胞染色体非整倍体发生率明显增高。