THBS2信号通路调控miR-1246对宫颈癌细胞侵袭转移能力的作用机制

A number of studies have shown that microRNA(miRNA) is closely ralated to the development of tumor. Thrombospondin 2(THBS2) is a disulfide-linked homotrimeric glycoprotein that mediates cell-to-cell and cell-to-matrix interactions. This protein has been shown to function as a potent inhibitor of tumor growth and angiogenesis.In our pilot study,we found that the expression level of THBS2 obviously declined in the cervical squamous cancer cell SiHa after transfecting miR-1246 mimics in vitro experiments,the cells' invasion and metastasis ability is also enhanced.Accordingly, we suspect that miR-1246 down-regulate the expression level of THBS2,which inhibits the tumours' growth,invasiveness and metastasis. That is miR1246-THBS2-ECM/MMPs/VEGF signaling pathways.To prove this ,we plan to continue the study, including:(1)identifying the target sites of miR-1246 on the 3'UTR terminal of THBS2 by cotransfection;(2) studying the invasive and migrative ablity of SiHa in vivo and vitro, the variation of extracellular matrix (ECM) and matrix metalloproteinase(MMP) by regulating the expression of target gene THBS2.Our subject is to investigate how miR-1246 promoting cervical squamous cancer invasion and metastasis,which could lay a foundation for microRNAs' oncotherapy.

多项研究表明MicroRNA(miRNA)参与肿瘤的发生发展， THBS2（血小板反应蛋白2）是一种介导细胞-细胞/间质间作用的糖蛋白，能抑制肿瘤的生长和血管形成。我们的先期研究发现，转染miR-1246的宫颈鳞癌SiHa细胞THBS2的表达明显下降，体外实验显示其侵袭转移能力也得以增强。本课题根据这些现象提出miR-1246可能通过下调THBS2的表达，从而促进肿瘤生长和侵袭转移的假说，即miR1246-THBS2-ECM/MMPs/VEGF 通路的存在。因此，拟持续进行相关研究：①用共转染方法明确THBS2的3'UTR端可能存在miR-1246的作用靶点；②通过上调和下调靶基因THBS2，研究SiHa在体外和体内的生长转移能力以及ECM（细胞外基质）、MMP（基质金属蛋白酶）的变化。本课题目的在于探讨miR-1246如何促进宫颈鳞癌的生长转移，为以miRNA为靶点的肿瘤治疗打下基础。

多项研究表明 MicroRNA(miRNA)参与肿瘤的发生发展， THBS2是一种介导细胞-细胞/间质间作用的糖蛋白，能抑制肿瘤的生长。我们的先期研究发现，转染 miR-1246 的宫颈鳞癌 SiHa 细胞 THBS2 的表达明显下降，其侵袭转移能力也得以增强。本课题提出 miR-1246 可能通过下调 THBS2 的表达，从而促进肿瘤生长和侵袭转移,通过本研究，为以 miRNA 为靶点的肿瘤治疗提供新的策略。主要研究成果有：.（1）依据软件分析结果设计THBS2的3’UTR短质粒(约20bp左右)，构建短质粒-荧光素酶 载体（含luc2报告基团），明确 THBS2 的 3’UTR 端存在 miR-1246 的 作用靶点。.（2）用携带miR-1246下调的重组慢病毒转染SiHa， 转染后SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力均降低；小鼠皮下种植肿瘤细胞（miR-1246抑制物组、阴性病毒对照组、空白对照组），miR-1246抑制物组的肿瘤细胞增殖能力明显降低,将移植瘤从裸鼠上剔除，用western blot 检测THBS2、MMP2、MMP9和ECM蛋白的水平。下调miR-1246使THBS2的表达增加，而降低了MMP2、MMP9的表达，ECM的表达有所增加。.（3）用携带THBS2过表达的重组慢病毒转染SiHa获稳转细胞，转染后SiHa细胞增殖、迁移、侵袭能力均降低；Western Blot检测MMPs蛋白的表达，MMP1、MMP2、MMP7、MMP9 随THBS2的表达增加而下降。小鼠皮下种植肿瘤细胞，过表达THBS2能抑制肿瘤细胞的增殖。 .（4）宫颈癌患者的血清miR-1246的表达水较健康妇女的相对高，并且与临床高危病理因素有关联；宫颈癌组织中THBS2表达水平较正常宫颈组织要低，并且与临床高危病理因素有关联，THBS2水平较低的宫颈癌患者预后较差。