肝移植供受体UGT基因SNPs与MMF代谢个体差异的相关性研究

肝移植一线抗排斥药MMF代谢个体差异大，是导致约38%的患者出现骨髓抑制、胃肠紊乱等毒副反应的重要因素。我们前期发现UGT SNPs影响该基因表达及酶活性，而UGT为MMF代谢主要限速酶，据此推测UGT SNPs与MMF代谢率及毒副反应相关。MMF代谢相关四个UGT酶分别分布于供体肝脏和受体肠道，同时考虑供受体遗传背景的影响才能阐明肝移植后MMF代谢个体差异机制。因此，本课题将从供受体的角度，兼顾四个UGT酶及其转录因子，通过定点突变在体外研究UGT SNPs与MMF代谢的关系；通过临床回顾性分析探讨UGT及其转录因子SNPs对MMF代谢的影响；最后设计前瞻性试验确认MMF代谢相关SNPs及其单体型。通过上述体外、体内研究，初步阐明肝移植患者MMF代谢个体差异的机制。本课题首次从供受体双重角度，研究汉族人群肝移植患者UGT及其转录因子SNPs与MMF代谢及毒副反应的关系，有利于个体化用药。

背景和目的：肝移植术后抗排斥药物MMF在个体间代谢率差异极大，个体间的遗传学差异可能是其主要原因。肝移植术后MMF的代谢酶分别来自供体肝脏和受体肠道。本项目从供体和受体双方的遗传学角度，探讨MMF代谢个体差异的机制，寻找中国人群MMF代谢相关SNPs，有望指导临床个体化用药。.实验方法：通过载体构建、定点突变、基因转染及体外药物实验初步筛选影响MMF代谢的各个代谢酶基因SNPs；通过SNP芯片及表达谱芯片开展中国人群肝脏组织EQTL研究并检测供体SNP，通过DMET芯片检测受体SNP，结合临床资料分析影响MMF代谢的UGT基因及其转录因子SNPs；通过DMET芯片及外显子芯片检测供体及受体MMF代谢酶及其转录因子SNPs，在另一组病例中结合临床资料验证前述研究发现的SNPs，最终确认影响中国人群MMF代谢的遗传位点。.结果：成功构建4个UGT基因及其13个SNP位点定点突变过表达质粒，通过体外药物实验发现11个与MMF代谢相关的SNP；首次开展中国人群肝脏EQTL研究，发现许多中国人特有的EQTLs;通过芯片检测供体及受体SNPs，结合临床资料分析发现5个与MMF代谢相关SNP；体外实验发现VDR调控UGT1A8/1A10表达，从而影响MMF代谢；芯片检测UGT及其转录因子VDR及HNF-1α SNPs，结合临床资料分析验证了前述发现的MMF代谢及毒副反应相关SNPs。.结论和意义：本项目通过芯片检测及体外细胞、分子实验，首次从供体和受体的角度发现肝移植术后多个与MMF代谢及毒副反应相关的SNPs；首次开展中国人群肝脏EQTL研究；首次发现VDR调控MMF代谢酶UGT1A8/1A10表达。本研究揭示了MMF代谢酶及其转录因子的遗传多态性是MMF代谢个体间差异的主要原因，发现多个影响中国人群MMF代谢的SNPs。研究成果有望指导临床MMF个体化用药，并为后续研究打下基础。