肝移植供受体白介素10基因单倍体型与他克莫司代谢差异相关性及其机制研究

肝移植术后免疫抑制不足或过量导致的排斥反应、药物毒副作用是影响患者长期生存的最主要因素之一，个体化用药是关键解决措施。课题组前期研究数据显示供体IL-10 -819C/T和-592C/A位点单核苷酸多态性（SNP）与他克莫司代谢相关；有研究证明受体IL-10 -1082A/G位点基因型影响他克莫司代谢；IL-10和药物代谢酶CYP3A5基因型协同分析可更准确区分他克莫司代谢表型。单倍体型分析较单个SNP检测能提供更多基因型-表型关联信息，因此供受体IL-10单倍体型对他克莫司代谢的影响作用及其机制值得深入研究。本项目采用测序技术、单倍体型分析和群体药物代谢动力学多因素分析解析供受体IL-10基因型与他克莫司代谢关系；应用人肝细胞培养、IL-10孵育、孕烷X受体基因转染和RNA干扰等技术探索IL-10对CYP3A4、CYP3A5表达和活性的调控机制；旨在为他克莫司个体化用药提供新基因标志物。

背景：他克莫司是肝移植患者应用最广泛的免疫抑制剂，其存在治疗窗狭窄、个体间变异性大等特点。实现他克莫司个体化免疫抑制治疗对于减少肝移植患者排斥发生、药物不良反应、机会感染及肿瘤高复发率，以提高移植受体和移植物的长期存活率至关重要。他克莫司体内代谢酶和转运蛋白主要是细胞色素P450(CYP)酶系和多药耐药基因1(MDR1)编码的P-糖蛋白。细胞因子参与器官移植术后排斥反应以及肝脏损伤后肝细胞再生及保护，故与肝功能密切相关。细胞因子可通过CYP酶和P-糖蛋白影响他克莫司代谢。.方法：课题组采用MassARRAY平台iPLEX Gold Assay方法检测肝移植供、受体CYP3A5、ABCB1、IL10、IL6及IL18基因多态性，收集移植术后他克莫司浓度/剂量(concentration/dose, C/D)值等临床信息，研究基因型与他克莫司C/D值的关联。课题组采用非线性混合效应模型筛选影响药动学的生理、病理等因素，采用图形法和自举法对最终模型和参数估算值进行评估。.结果：供、受体CYP3A5基因多态性与他克莫司代谢的关联得到验证，而MDR1与IL10基因多态性与他克莫司代谢无关。供体IL6基因rs1800796位点与他克莫司代谢相关，且与移植术后肝功能相关，因此推测供肝表达的IL6通过影响肝功能导致肝移植患者他克莫司代谢差异。供体IL18基因rs5744247位点与他克莫司代谢相关且能够进一步区分CYP3A5表达患者他克莫司代谢速率。供体IL18基因rs7106524位点和rs1946518位点组成的单倍型与他克莫司代谢相关。肝移植患者他克莫司群体药物动力学模型显示他克莫司日剂量、红细胞压积、总蛋白和磺脲类降糖药对表观清除率有影响，红细胞压积和总蛋白对表观分布体积有影响。.结论：本项目验证了供、受体CYP3A5基因与他克莫司代谢相关，在探索IL-10基因型与他克莫司药物代谢的关联中未取得成功。但通过高通量基因分型，新发现供体IL6基因rs1800796位点，供体IL18基因rs5744247与他克莫司代谢相关，证明了细胞因子基因型对肝移植患者他克莫司代谢的影响。同时我们完成了肝移植患者他克莫司群体药物动力学模型的建立和验证，有助于实现肝移植术后他克莫司个体化免疫抑制治疗。