基于miR-34a介导Sirt1/mTOR通路研究艾灸抗CD肠纤维化机制

Transmural fibrosis of Crohn's disease (CD) can erode the whole layers of the intestinal wall. Based on the promising effectiveness of moxibustion in the treatment of intestinal fibrosis of CD in the past, we consider that abnormal autophagy of fibroblasts may be the key mechanism of fibrosis, and try to study with in vivo animal experiment and in vitro cell experiment by using modern molecular biology techniques and methods, To confirm: ① The abnormal expression of the main medium of Snail and α-SMA in CD of chronic intestinal inflammation and injury repair, the abnormal expression of autophagy related molecule LC3- II /LC3- II and pBcl-2/Bcl-2. MiR-34a is one of the key factors to fibrosis of CD which induced the Sirt1/mTOR pathway to play a role in the CD frbrosis and regulation of autophagy activity.② Make a preliminary explanation that moxibustion may affect the expression of miR-34a by acting on the SIRT1 / mTOR pathway, thereby modulating CD intestinal fibrosis and colon autophagic activity, objective to improve the clinical efficacy of acupuncture and moxibustion in the treatment of Crohn's disease, to provide scientific experimental data and theoretical basis for the elucidation of the mechanism of acupuncture and moxibustion in the treatment of intestinal fibrosis in Crohn's disease.

纤维化是克罗恩病（CD）常见而治疗最为棘手的难题。本课题组在以往大量针灸治疗CD及肠纤维化有效的基础上，以“肠成纤维细胞是导致CD肠纤维化的主要细胞”为切入点，运用现代分子生物学技术和方法，试图从体内动物实验和体外细胞实验相结合的方法研究：①拟证实CD肠道慢性炎症与损伤修复的主要介质Snail和α-SMA表达异常，自噬相关分子LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和pBcl-2/Bcl-2的表达异常，miR-34a介导Sirt1/mTOR通路参与CD肠纤维化和CD结肠组织自噬活性的调节，miR-34a是克罗恩病肠纤维化的关键致纤维化因子之一；②初步阐释艾灸可能通过影响miR-34a的表达，作用SIRT1/mTOR通路，调节CD肠纤维化和结肠自噬活性，以达到提高针灸治疗克罗恩病肠纤维化的临床疗效之目的，为针灸治疗克罗恩病肠纤维化效应机制的阐明提供科学实验资料及理论基础。

本项目在针灸治疗克罗恩病（Crohn'sDisease，CD）有效的基础上，通过制备克罗恩病肠纤维化动物模型，运用组织学、细胞学、分子生物学等多种现代科学技术方法，开展基于miR-34a介导Sirt1/mTOR通路研究艾灸抗CD肠纤维化机制研究。通过研究发现并证实：1）隔药灸可通过降低大鼠结肠组织炎症损伤水平，有效缓解TNBS诱导的克罗恩病肠纤维化大鼠的结肠纤维化水平，抑制结肠组织的过度修复；2）CD肠道慢性炎症与损伤修复的主要介质E-cadherin、α-SMA、Vimentin、collagen I、collagen III表达异常相关，自噬相关分子LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、ATG16L1和p62等的表达异常，miR-34a介导Sirt1/mTOR通路参与CD肠纤维化和CD结肠组织自噬活性的调节，miR-34a是克罗恩病肠纤维化的关键致纤维化因子之一；3）隔药灸可明显抑制CD肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞中过度活化的自噬，调节自噬相关蛋白p-mTOR、VPS34、ATG16L1、p62、Beclin-1和LC3II的表达，抑制肠道组织的异常纤维化；4）隔药灸抑制克罗恩病肠纤维化大鼠结肠组织中过度活化的自噬，是通过对Sirt1/mTOR信号通路调控发挥作用的，影响Sirt1/mTOR信号通路的反馈，恢复过度激活的CD结肠自噬活性，继而缓解了克罗恩病肠纤维化大鼠的肠道纤维化；5）隔药饼灸可以下调TNBS诱导的克罗恩肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞，纠正异常的细胞增殖，改善细胞周期，通过影响miR-34a的表达，作用 Sirt1/mTOR通路，调节miRNA-34a-5p、mTOR、SIRT1的基因表达水平，改善自噬活性，抑制肠纤维化标志蛋白α-SMA和Vimentin的表达，从而实现针灸治疗疗克罗恩病肠纤维化的临床疗效之目的。研究成果为针灸治疗克罗恩病肠纤维化效应机制的阐明提供科学实验资料及理论基础。.项目已发表学术论文7篇（其中SCI收录4篇），部分相关成果获中医药国际贡献奖科技进步二等奖1项，获授权专利6项，项目负责人获第十六届中国青年女科学家奖，入选国家百千万人才工程，入选国家中医药管理局青年岐黄学者，培养博士生1名，硕士生1名。