艾灸对CD中LKB1/AMPK-PI3K/AKT转导网络与自噬间交互作用的调控机制

The occurrence and development of crohn's disease (CD) is closely related to the autophagy susceptibility genes, the imbalance on network of LKB1 - AMPK - PI3K - AKT signaling pathways is one of the key links to cause abnormity of CD autophagy. Based on the effectiveness of acupuncture and moxibustion on CD, this study further using histology, cytology, molecular biology and other modern technology method, combining in vivo and in vitro experiments, to confirm: 1) cell autophagy play roles in CD mucosa injury and immune imbalance;LKB1 / AMPK - mTOR and PI3K/AKT - mTOR signalling network involved in the regulation of CD autophagy, which can activate and inhibit the autophagy to play both a positive and negative regulatory role in the occurrence and development of CD. 2) intends to clarify that moxibustion may regulate intestinal epithelial cell autophagy, protect the CD colonic mucosa barrier, inhibiting intestinal inflammation, regulating intestinal immune imbalance, thus play a role of treatment via adjusting the interaction between LKB1 / AMPK - PI3K/AKT transduction network and autophagy. To further explaining the effect mechanism of moxibustion on CD, and providing scientific evidence for acupuncture and moxibustion in the treatment of CD.

克罗恩病（CD）的发生、发展与自噬易感基因密切相关，LKB1-AMPK-PI3K-AKT信号通路网络的失衡是引起CD自噬流异常的主要关键环节之一，本项目拟在针灸治疗CD有效的基础上，进一步运用组织学、细胞学、分子生物学等现代技术方法，将体内、体外实验相结合，拟证实：1）细胞自噬参与CD黏膜损伤与免疫失衡；LKB1/AMPK-mTOR与PI3K/AKT-mTOR信号转导网络参与CD自噬的调节，具有激活和抑制自噬的正负调节作用，在CD的发生发展中发挥重要作用。2）拟阐明灸法可能通过调节LKB1/AMPK-PI3K/AKT转导网络与自噬间交互作用，调节肠上皮细胞自噬，保护CD结肠黏膜屏障，抑制肠道炎症，调节肠道免疫失衡，从而发挥治疗作用。深入阐释艾灸治疗CD的效应机制，为针灸治疗CD提供科学证据。

本项目在针灸治疗克罗恩病（Crohn's Disease，CD）有效的基础上，通过制备克罗恩病动物模型，运用组织学、细胞学、分子生物学等多种现代科学技术方法，开展艾灸对CD中LKB1/AMPK-PI3K/AKT转导网络与自噬间交互作用的调控机制研究。通过研究发现并证实：1）隔药灸可通过调节大鼠结肠组织的自噬、免疫相关的基因表达谱，调控与CD密切相关的信号通路，有效缓解TNBS诱导的克罗恩病大鼠的肠道炎症，促结肠组织损伤的修复；2）克罗恩病大鼠结肠组织自噬活化，且自噬流发生，自噬底物进行降解为其主要发病机制之一；CD大鼠LKB1-mTOR- PI3KC信号转导网络中上游因子PI3K、AKT1、LKB1均被激活，可抑制mTOR的活性，与CD大鼠自噬的发生密切相关；3）隔药灸可明显抑制克罗恩病大鼠结肠组织中过度活化的自噬，调节机体免疫相关因子IL-1β、IL-17和TNF-α的表达，抑制肠道炎症；4）隔药灸抑制克罗恩病大鼠结肠组织中过度活化的自噬，是通过对LKB1-mTOR- PI3KC信号转导网络调控发挥作用的，继而缓解了克罗恩病大鼠的肠道炎症；5）隔药饼灸可以下调TNBS诱导的克罗恩大鼠血清外泌体中多数miRNAs的表达，其中 4个自噬相关差异miRNAs（rno-miR-30b-5p，rno-miR-142-3p，rno-miR-106b-5p，rno-miR-30c-5p）PCR检测结果与测序结果趋势具有一致性，其中miR-30b-5p对ATG12，ATG5具有靶向调控作用。研究成果为针灸治疗克罗恩病提供了科学依据。.项目已发表学术论文7篇（其中SCI收录3篇），出版著作1部，部分相关成果获上海市科技进步一等奖1项，获授权专利5项，培养博士生2名，硕士生1名。