乙肝表面抗原亚病毒颗粒携带miR-939通过调控单核细胞活化对肝脏炎症反应的作用及机制研究

Liver inflammation caused by chronic hepatitis b virus (HBV) infection is closely related to the progression of the disease, but the immunological mechanism involved in the inflammatory response remains to be further clarified. Hepatitis B surface antigen (HBsAg) can form non infectious subviral particles, which are abundant in the circulation of chronic hepatitis B (CHB) patients and mostly internalized by monocytes. Recent studies have indicated that HBsAg particles carry selective pools of hepatocellular miRNAs, while the function and meaning remain unclear. Based on clinical cohort, our preliminary studies have shown that HBsAg particles can carry immune regulatory miRNAs, which are positivly correlated with the liver inflammatory activity. Among these miRNAs, miR-939 showed the ability to enhance the immune function and cytokine production of monocytes. Therefore, using multiple in vitro models, we propose to explore the manner and mechanism of HBsAg-carried miR-939 regulating the immune fuction of monocytes. Furthermore, we will confirm the effect of HBsAg-carried miR-939 in the inflammation response during CHB infection based on clinical cohorts and animal models. This project will help to deepen the understanding of CHB infection-induced influence and regulation on the host immune system, and provide a new perspective and theoretical basis for the development of anti-HBV strategies.

乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染所致肝脏炎症与疾病进展密切相关，但参与炎症反应的免疫学机制有待进一步阐明。乙肝表面抗原（HBsAg）以亚病毒颗粒形式大量存在于慢性感染者外周循环中，并主要被单核细胞所摄取。已有证据表明HBsAg携带肝细胞来源miRNAs，但功能意义尚不清楚。申请人前期发现，HBsAg携带有一群具免疫调节功能的miRNAs，其含量与肝脏炎症活动呈显著正相关；其中miR-939表现出增强单核细胞分泌细胞因子的能力，因此推测HBsAg携带miR-939可能通过调控单核细胞活化参与肝脏炎症反应。本项目拟利用体外细胞模型研究HBsAg携带miR-939调控单核细胞免疫功能的方式及机制，并在慢乙肝患者样本、乙肝小鼠模型中验证HBsAg携带miR-939对肝脏炎症反应的调控作用。本项目的开展将有助于从机制层面拓展对HBV慢性感染调控宿主免疫的认识，为研发针对性治疗策略提供新视角和理论基础。

项目背景：HBV慢性感染能够导致不同程度的肝脏疾病，包括慢性乙型肝炎、肝硬化甚至肝癌。HBV并不直接引起肝细胞病变，肝脏损伤主要是由于宿主免疫反应攻击被感染肝细胞所致。课题组前期研究表明，HBsAg能够通过调控单核细胞分泌细胞因子参与慢性乙型肝炎免疫调控反应。另有研究发现，CHB患者外周血HBsAg中能够检测到肝细胞来源miRNAs。本研究旨在深入阐明HBV慢性感染过程中，HBsAg调控单核细胞免疫功能的分子机制以及二者相互作用对HBV慢性感染导致肝病疾病进程的影响。主要研究内容：本研究首先检测CHB自然感染队列中血浆miRNAs及细胞因子表达谱，并分析与临床指标相关性。进而利用多种方法检测HBsAg携带肝细胞miRNAs的能力，再进一步分析HBsAg携带miRNAs在CHB自然感染队列中的表达情况。利用多体系检测HBsAg介导所携带miRNAs进入单核细胞的能力，并探究HBsAg携带免疫调节性miRNAs对单核细胞的免疫调控作用及分子机制。最终，在HBV慢性感染导致终末期肝脏疾病队列中检测免疫调节性miRNA和炎性细胞因子的表达水平，分析二者与肝脏炎症/纤维化及病程发展相关性。重要结果及数据：血浆miRNAs表达谱提示，肝特异性miRNAs与HBsAg呈极显著相关性，免疫调节性miRNAs与ALT存在正相关性。本研究通过多种方法验证HBsAg亚病毒颗粒能够携带肝细胞miRNAs，并且HBsAg携带免疫调节性miRNAs与ALT及多种细胞因子呈正相关。其中，HBsAg携带miR-939与IL-8之间的相关性最显著（p=0.0014）。进一步证实HBsAg能够介导特异性miRNAs进入单核细胞，HBsAg携带miR-939能够增强单核细胞活化并选择性激活MAPK-p38-IL-8信号通路。在HBV慢性感染导致终末期肝脏疾病队列中，miR-939与IL-8呈极显著正相关，二者表达趋势均与肝脏炎症及纤维化分期存在相关性，IL-8在HBV-HCC晚期病程中存在高表达。研究意义：本研究结果揭示HBsAg可能可以作为一种新的载体模式，通过将肝细胞miRNAs递送到单核细胞，促进肝实质细胞与免疫细胞之间的信号交流。本研究可能有助于加深对诱导肝脏炎症、加重肝脏损伤、促进HBV感染相关肝脏疾病进展的免疫发病机制的认识，并为HBV慢性感染导致肝脏疾病炎症预测和治疗策略提供新靶点。