局部内皮祖细胞捕获促进支架术后动脉瘤愈合的实验研究

课题组前期研究表明血管内皮祖细胞（EPC）参与支架术后动脉瘤愈合，但局部着床发挥愈合作用的EPC比例较低，存在治疗后动脉瘤延期愈合及延迟内皮化问题。EPC表达如CD133、CD34及α4整合素等多种蛋白。本课题拟采用抗上述三种蛋白的单克隆抗体，以接枝法修饰到血流导向支架表面设置EPC捕获功能，并体外检测修饰抗体密度、均匀性、牢固性以及抗体活性。后在模拟人体血流状态的生物反应器中与EPC共同培养，体外观测比较三种抗体捕获EPC及促进内皮修复的能力。再将修饰支架植入动脉瘤模型兔体内，通过示踪技术、血管造影、硬组织切片、免疫组化、扫描电镜等在体比较三抗体捕获EPC、促进支架及瘤颈内皮化的能力。本课题在前期工作基础上初步研究EPC参与动脉瘤愈合的调节机制，进一步探讨通过局部捕获EPC促进动脉瘤术后愈合的可行性，为寻找提高动脉瘤疗效的新方法提示方向，为其临床应用提供可靠的实验依据。

课题组首先通过体外实验及动物模型研究，探讨细胞趋化因子SDF-1α在对内皮祖细胞（EPCs）的趋化作用及相关机制、SDF-1α在囊性动脉瘤早期形成过程中的表达变化。支架表面的内皮化是重建血管从而使动脉瘤支架术后稳定愈合的关键。因此，课题组还研究了SDF-1α及其抑制剂在支架术后动脉瘤愈合中的作用。为探讨局部捕获内皮祖细胞技术促进动脉瘤愈合的可行性，课题组与合作单位制作EPCs捕获支架并治疗动脉瘤模型体内，探讨其促进动脉瘤愈合的作用。.课题组通过体外实验，获得符合生物学要求的EPCs；且发现SDF-1α对EPCs具有趋化作用，不同梯度的SDF-1α迁移结果不同，500ng/ml的迁移效果最强，SDF-1/CXCR4阻断剂可减弱迁移效果；在使用趋化因子后，EPCs粘附分子VE-cadherin表达升高。.并实验发现SDF-1α在兔囊性动脉瘤形成早期表达在内膜表面，并呈现动态变化，在术后7至14天，SDF-1α表达最为明显。.在支架术后动脉瘤愈合的过程中，通过给予SDF-1α及CXCR4趋化因子受体拮抗剂AMD3100动员兔外周KDR阳性细胞，结果发现SDF-1α及AMD3100均可使兔外周血KDR阳性细胞明显升高，并可促进动脉瘤术后瘤颈内膜修复，促进动脉瘤愈合。.课题组与北京乐普医疗器械有限公司合作，利用合作单位金属表面多肽修饰专利技术（公开号CN101607097 B），将CD34抗体修饰到了不锈钢支架网丝表面，得到了EPCs捕获支架，并将裸支架与捕获支架植入到兔囊性动脉瘤模型体内。造影显示：捕获支架能促进动脉瘤影像学愈合。在瘤颈口处，捕获支架组的大体标本网丝之间可见有内皮组织生长，裸支架组网丝之间无明显内皮组织生长；病理切片见两组支架网丝之间均无明显内皮组织生长，在捕获支架组网丝表面新生内膜厚度更厚；扫描电镜见捕获支架组网丝上及相邻网丝间的内皮平均覆盖率均高于裸支架组；结果表明，尽管我们采用的支架金属覆盖率低，内皮组织不能完全覆盖网丝间的空间，但捕获支架组瘤颈口网丝的内皮覆盖率高于裸支架组，提示捕获支架仍然有促进瘤颈口稀疏的网丝之间内皮生长的趋势。.在血管壁处，大体标本及病理均见捕获支架组较裸支架组在血管壁处内皮组织面积更大、厚度更高；扫描电镜显示两组内皮平均覆盖率、单位面积内皮样细胞个数无明显差异。提示捕获血管壁处支架组内皮覆盖程度并不明显优于裸支架组。