调节性T细胞与肝癌细胞直接“交叉对话”促进肝癌侵袭转移的机制研究

新理论认为：肿瘤是一种免疫和微环境疾病。我们前期研究发现，肝癌微环境CD4+CD25+FOXP3+调节性T 淋巴细胞（Treg）与肝癌侵袭转移特性及不良预后密切相关。我们推测除已知的免疫抑制效应,Treg还可直接促进肝癌侵袭潜能：Treg与肝癌细胞共培养的实验结果支持这一推测。本研究从微环境的角度，以Treg为代表，研究免疫微环境对肝癌侵袭转移潜能的直接影响、STAT3在其中的关键作用以及利用信号通路发现者芯片探索起作用的其他潜在信号分子机制。通过体外细胞共培养、体内共移植和机制研究，拟阐明Treg直接促进肝癌生长和侵袭转移，两者之间存在一个正反馈调节。打破这一恶性循环不仅降低/逆转肝癌侵袭转移潜能，而且攻破微环境免疫抑制网路，从而减少肝癌的复发转移。

本项目严格按照既定的研究计划，圆满完成研究目标，主要成果有：.1、阐明了调节性T细胞（Treg）在肝癌微环境的分布特征：在外周血、癌旁肝和肝癌癌内的三处不同微环境中, Treg表型与分布截然不同；Treg浸润程度与肝癌的恶性侵袭特征显著相关,提示Treg具有促进肝癌侵袭的作用；不同麻醉方法对围手术期外周Treg数目、比例和功能的影响显著。.2、阐明了癌内Treg的特异性的功能及分子标记：对比肝癌和癌旁肝的Treg全基因表达谱发现，癌内Treg相对于癌旁肝Treg共有1032个基因表达上调； PATHWAY显示有7条上调通路；GO显示有431条GO条目上调。其中RANK-RANKL和IL6-IL-6R信号通路，在Treg促进肝癌侵袭中起重要作用。.3、发现Treg通过“细胞因子和细胞接触机制”促进肝癌侵袭：癌内Treg分泌的免疫抑制因子IL-17、IL-10和TGF-β1在Treg促进肝癌侵袭作用中发挥着关键性的作用； Treg和肝癌细胞之间的cell-cell contact也是Treg促进肝癌侵袭的重要方式。.4、发现“IL-17→AKT→IL-6→JAK2/STAT3通路”在Treg促进肝癌侵袭中的重要作用：Treg分泌的IL-17对通过其受体IL-17RA直接作用于肝癌细胞。IL-17通过活化AKT来激活IL-6的转录和表达, IL-6进一步活化STAT3及STAT3的下游的IL-8、VEGF、MMP2，进而加速肿瘤的血管形成、中性粒细胞浸润和组织侵袭。.5、发现索拉非尼对肝癌细胞STAT3通路的特异性阻断，因此，借此可阻断Treg对肝癌侵袭性的促进作用：索拉非尼通过阻断 MEK/ERK/STAT3（S727位点）通路，和PI3K/AKT/STAT3 （Y705位点）通路，以抑制STAT3的磷酸化和激活，从而抑制肝癌细胞的生长和侵袭. .6、完善了免疫磁珠分选平台：通过酶消化法、Percoll梯度离心法、auto MACS磁珠分选仪，可获取高纯度的微环境细胞；完善了体内外微环境细胞相互作用研究平台：体外—Matrigel胶混合培养、Transwell上下室共培养模型；体内—微环境细胞和癌细胞共接种模型、癌细胞原位接种+微环境细胞尾静脉注射模型。.7、发表标注资助的SCI 论文10篇（第一作者8篇）、第一作者英文综述1篇。