环状RNA circ_0001585作为竞争性内源RNA结合miR-133b促进ESRD血管钙化的机制研究

Vascular calcification is an important cause of high mortality in patients with end-stage renal disease (ESRD). Previous studies have found that the miR-133b/Runx2 axis is activated in calcified vascular tissues of ESRD patients and preliminary verification that the circular RNA circ_0001585 is negatively correlated with miR-133b expression. Therefore, firstly, this project will use the gene interference technology to explore the role of circ_0001585 in the transformation of vascular smooth muscle cells (VSMC) into osteoblast-like cells in cell experiments; secondly, using RNA-binding protein immunoprecipitation, dual luciferase reporter genes technologies verified the interaction between circ_0001585 and miR-133b and its regulation on downstream Runx2 and effector molecules . Finally, the effect of vascular calcification was verified by siRNA knockout circ_0001585 in animal experiments. This study will expand the new understanding of the mechanism of ESRD vascular calcification, and provide a new idea and target for the diagnosis and treatment of ESRD vascular calcification.

血管钙化是终末期肾脏病(ESRD)患者高死亡率的重要原因。前期研究发现miR-133b/Runx2轴在ESRD患者已钙化血管组织中呈活化状态，且初步验证环状RNAcirc_0001585与miR-133b表达呈负相关，因此我们推测：环状RNAcirc_0001585作为竞争性内源RNA结合miR-133b促进ESRD血管钙化。因此，本研究将首先运用基因干扰技术，在细胞实验中探讨circ_0001585对血管平滑肌细胞（VSMC）向成骨样细胞转换中的作用；其次运用RNA结合蛋白免疫沉淀技术、双荧光素酶报告基因等技术验证circ_0001585与miR-133b互作关系及其对下游Runx2及其他效应分子的调控作用；最后，动物实验中应用siRNA敲除circ_0001585验证对ESRD血管钙化的作用。本研究将拓展对ESRD血管钙化发生机制的新认识，为ESRD血管钙化诊断和治疗提供新思路及靶点。

心血管疾病是导致CKD患者死亡的首要原因，而血管钙化在其中发挥关键作用。本研究的主要研究内容为：（1）基础研究：探讨终末期肾脏病血管钙化的分子生物学机制及其短链脂肪酸对血管钙化的保护作用；（2）临床研究：横断面研究探讨终末期肾脏病患者血管钙化的相关危险因素；队列研究探讨血管钙化与血液透析患者心血管事件及全因死亡发生风险的关系。结果及科学意义：（1）通过体外实验证实尿毒症血管钙化增加，发现尿毒症血管组织中的血管钙化相关的miRNA-mRNA调控网络并筛选出差异表达的miRNA及mRNA，从该角度揭示血管钙化的分子生物学机制，2）提高保护性代谢物短链脂肪酸（SCFAs）的生成，揭示短链脂肪酸对防治CKD钙化的作用，研究筛选差异表达的小RNA及mRNA,发现短链脂肪酸可通过抑制mi-133b/NF-kb/BMP-2途径激活对血管钙化提供保护作用；3）通过横断面研究探讨血管钙化的患病率，经统计学分析阐明了血管钙化的相关危险因素；4）通过前瞻性队列研究探讨胸部正位片检测到的血管钙化与ESRD患者不良临床结局的相关风险。本项目探讨血管钙化的分子生物学机制及其防治方法有利于解决血管钙化这一关系到CKD人群生活质量及生存寿命的重要科学问题。