茶树特异新品种‘紫娟’花色苷的分离纯化及其分子结构的研究

'ZiJuan' is a new special tea cultivar in Yunnan province, and belong to Camellia sinensis var. assamica. The characteristic of 'ZiJuan' is high content of anthocyanins. In this project, the isolation and structure identification of anthocyanins in 'ZiJuan' will be developed using the theory and approaches of phytochemistry and on the base of our previous study.The composition and content of anthocyanins will be determinated. And the mechanism of the formation and transformation of anthocyanins will be revealed. The anthocyanins in "ZiJuan" tea leaves will be isolated by column chromatography, Thin Layer Chromatography (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). A technology for isolation the anthocyanins in "ZiJuan"tea leaves will be developed. The structure of anthocyanins in "ZiJuan"tea leaves will be identified by Spectroscopy methods, such as Mass Spectrometry (MS) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR). The results of this research will be effictive in further study on the mechanism of purple leaf of "ZiJuan" and definite the characteristic feature of anthocyanins in "ZiJuan"tea leaves and tea production.

'紫娟'属山茶科（Theaceae）山茶属（Camellia）茶组植物[Camellia sinensis(L. )O.Kuntze]茶种（Camellia sinensis）中的普洱茶变种（C. sinensis var. assamica），是云南所特有的茶树特异新品种，花青素（花色素与花色苷的总称）含量高是其特有的品种特征之一。本项目拟在团队已有的研究基础上，应用①植化理论和研究方法，研究'紫娟'花色苷的组分与含量，探讨其形成机制和转化机理；②通过柱层析法、薄层层析法（TLC）、高效液相色谱法 (HPLC) 分离纯化'紫娟'的花色苷，构建'紫娟'花色苷的提取、分离及纯化技术体系；③采用MS，NMR为中心的波谱测定法确定'紫娟'花色苷的分子结构。研究结果将会对诠释'紫娟'紫叶呈色机理，明确'紫娟'花色苷的特性以及'紫娟'特色茶的生产、加工和促进云南茶产业的可持续发展产生深远的影响。

‘紫娟’（Camellia sinensis var. assamica）是云南所特有的茶树特异新品种，花色苷含量高是其特有的品种特征之一，‘紫娟’茶在花色苷的开发与研究方面存在潜在的利用价值。本项目以采制标准为一芽二、三叶的‘紫娟’茶新梢（含鲜叶样和干燥样）为研究材料，开展了如下三个方面的研究：一是研究了‘紫娟’茶幼嫩组织及叶片中花色苷的组成、花青素总含量，探讨‘紫娟’茶花色苷的组成和含量与新梢生育程度、时间（季节）的关系；二是通过柱层析（CC）、薄层层析（TLC）和高效液相色谱（HPLC）等分离纯化方法，研究‘紫娟’茶花色苷的分离纯化技术；三是以HPLC-ESI-MS/MS法研究‘紫娟’茶花色苷单体化合物的分子结构。通过项目的研究取得了如下的主要成果：.1、构建基于响应面法的‘紫娟’茶花青素的最佳提取工艺。.2、‘紫娟’茶花色苷属黄酮类色素；‘紫娟’茶中含有矢车菊色素、飞燕草色素、牵牛花色素等B-环有邻位酚羟基的花色苷，且具有4’-羟基，在3-羟基上形成糖苷； ‘紫娟’茶花色苷中有多个乙酰化基团；‘紫娟’茶中共检查到11个花色苷色谱峰。.3、‘紫娟’茶花色苷含量随季节变化的幅度较大，呈春季到夏季花色苷含量急剧上升，夏季至秋季又趋于缓慢减少的趋势，6月初（5.8mg/g）最低，7月底（61.6mg/g）达到最高。‘紫娟’茶花色苷在组成上没有季节性差异。.4、‘紫娟’茶花青素含量呈一芽一叶新梢＞一芽二叶新梢>一芽三叶新梢>芽>成熟叶的趋势。.5、构建了基于MCI GEL CHP 20P树脂柱和SephadexTM LH-20葡聚糖凝胶柱，不同梯度的5%的酸性甲醇-水溶液洗脱的紫娟茶花色苷分离纯化技术体系。.6、获得了6种主要的花色苷，通过HPLC-ESI-MS/MS分析，明确了6种花色苷分别是：飞燕草素-3-O-半乳糖苷；矢车菊素-3-O-半乳糖苷；飞燕草素-3-O-（6-（Z）对香豆酸）吡喃半乳糖苷；矢车菊素-3-O-（6-（Z）对香豆酸）吡喃半乳糖苷；飞燕草素-3-O-（6-（E）对香豆酸）吡喃半乳糖苷；矢车菊素-3-O-（6-（E）对香豆酸）吡喃半乳糖苷。