云南普洱茶特殊多酚类物质的组成、分子结构及抗氧化活性的研究

本研究利用云南丰富的普洱茶资源为研究材料，以普洱茶特殊酚类物质为研究对象，拟在课题组已开展的预备试验的基础上，采用水及不同浓度的有机溶剂、柱层析法、TLC、HPLC法等提取、分离、纯化普洱茶特殊酚类物质，构建普洱茶特殊酚类物质的提取、分离与纯化技术体系；采用1H-NMR、HPLC/MS液质联用分析法确定普洱茶特殊酚类化合物的分子结构。在此基础上应用获得的单体成分，以实验小鼠为研究对象进行抗氧化活性试验，揭示普洱茶特殊多酚类化合物单体成分抗氧化作用以及构效关系和机理。为丰富自由基生物医学和茶叶生物化学的理论，天然抗氧化剂，普洱茶及茶多酚的后续研究和开发提供理论依据。

迄今为止，国内外对普洱茶的多酚类物质从植物化学和化学成分检测的方面开展了一定研究。但对普洱茶单体成分的研究远远落后于其他茶类，特别是对如筛选出高纯、高效、安全的功能因子和功能机理的研究都尚处于空白，给普洱茶的进一步开发利用带来了一定阻碍。因此，本项目以丰富的云南普洱茶资源为研究材料，以①云南不同普洱茶主产茶区的普洱茶为研究材料，研究不同产地、不同发酵时期、不同年代普洱茶特殊多酚类化合物的组成与含量；②分离、提取、纯化普洱茶特殊多酚类化合物，构建普洱茶特殊多酚类化合物的提取、分离与纯化技术；③LC/MS液质联用、NMR等分析法确定其分子结构；④应用获得的单体成分或多酚类粗提物，以体外抗氧化或实验小鼠为研究对象进行抗氧化活性试验，揭示普洱茶特殊多酚类化合物单体成分抗氧化的构效关系和机理。通过项目的研究取得了如下的主要成果：.1．确立了提取普洱茶（熟茶、生茶）多酚类物质的最佳工艺条件。.2．通过响应面法研究并确立了普洱熟茶和生茶中属多酚类物质的黄酮类化合物的最佳提取工艺。.3．明确了不同茶区普洱茶（熟茶、生茶）中多酚类物质儿茶素的组成与含量以及咖啡碱和茶多酚总量等的异同。.4．明确了不同年份普洱茶（熟茶、生茶）中多酚类物质没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、1,4,6-tri-O-galloyl（1,4,6-tir-G-G）、表儿茶素没食子酸酯和总多酚含量的差异。.5．明确了不同茶区普洱生茶中属多酚类化合物的黄酮类物质含量的异同。.6．明确了不同年份普洱生茶中黄酮类化合物的变化规律。.7．从普洱熟茶中获得了杨梅素、槲皮素、山奈酚、芦丁（普洱熟茶中首次分离获得）和杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷等黄酮类化合物单体成分。.8．首次从普洱茶发酵样中获得了特殊多酚类物质单体成分Teadenol A。.9．证明了不同浓度乙醇-水梯度洗脱所得到的普洱熟茶黄酮类物质粗品对SD大鼠心肌组织、肝组织中、肾组织和脑组织均具有抗氧化作用，并具有良好的剂量-效应关系；.10．体外抗氧化实验证明，Teadenol A具有较强的抗氧化活性。.11．明确了普洱茶发酵过程中茶多酚、儿茶素、黄酮及黄酮醇的变化规律，并且探明了普洱熟茶的色素和红茶色素并非同类物质。.12．撰写并申请了“一种基于响应面法提取普洱熟茶黄酮类化合物的方法