基于肠道微生态对T细胞平衡的影响探讨参苓白术散治疗脾虚型功能性腹泻的机制

Functional diarrhea (FD) is a common disease in human digestive system, in Traditional Chinese Medicine (TCM) theory, the pathogenesis for FD is spleen deficiency and dampness stagnation. Previous research proved that the occurrence of FD is correlated with imbalance of Th/Treg cells components and microbiota composition. Shenling Baizhu powder oriented from clisscal TCM《Taiping Huimin Heji Ju Fang》, could treat spleen deficiency and dampness stagnation syndrome, usually used in the treatment for FD patients in clinical. The preliminary study found that the evil dampness environment can cause mice intestinal flora imbalance, leading to intestinal microenvironment changes, meanwhile, affecting the composition of T lymphocyte subgroup Th/Treg cells imbalance. Based on our previous study, the research focus on the intestinal microecology, through examining intestinal flora species and quantities changes by 16SrDNA technology, and by examining the changes of the intestinal mucosal Th/Treg cells composition, to explore the mechanism of Shenling Baizhu powder in the treatment for FD, and supporting Shenling Baizhu powder in the treatment for spleen deficiency sndrome FD patients in clinical.

功能性腹泻（functional diarrhea, FD）是常见的消化系统疾病，中医病机属于脾失健运，脾虚泄泻，属于中医泄泻的范畴。研究认为本病的发生与肠道微生态及T细胞介导的炎性平衡相关。“参苓白术散”出自《太平惠民和剂局方》，具有益气健脾，渗湿止泻功效，为治疗脾虚证腹泻的代表方剂，临床常用于治疗脾虚挟湿型泄泻。申请人前期研究发现湿邪可以引起肠道菌群失调，导致肠道微环境改变，且湿邪可以影响机体内辅助性T淋巴细胞亚群Th/Treg免疫平衡，降低机体免疫识别和应答功能。本研究拟在已有研究基础上，从肠道微生态角度，通过16SrDNA技术检测脾虚型功能性腹泻大鼠肠道菌群种类及数量变化，并通过检测肠道黏膜Th/Treg免疫平衡的变化，探讨参苓白术散治疗脾虚型功能性腹泻的具体内在机制，为中医临床参苓白术散治疗脾虚型功能性腹泻提供基础研究支持。

项目的背景: 功能性腹泻( functional diarrhea，FD)在临床上是消化科常见的一种功能性胃肠疾病，患者表现为持续的或反复的排松散(糊状)便或水样便，且75% 以上的患者排便不伴有腹痛症状，发病病史至少6个月，且近3个月患者出现的症状与以上标准相符方可诊断。脾虚型功能性腹泻的发病机制尚未完全研究清楚。目前现代医学对该病的治疗容易复发，临床上中医药对该病的治疗有明显的优势与特色。分析肠道微生态及其介导的 Th17/Treg 平衡的调节作用, 阐述脾虚型功能性腹泻的发病机制和参苓白术散的治疗机制，可以为中医临床采用参苓白术散治疗脾虚型功能性腹泻提供基础研究支持和理论依据。.主要研究内容：首先用大黄颗粒水溶液灌胃建立脾虚型FD大鼠模型并进行评价，观察记录各组大鼠一般状态，体重变化，腹泻情况，造模及给药后行旷场实验（Open Field Test，OFT）。实验结束时取材，比较各组大鼠血清D-木糖浓度，用ELISA法测定血清白介素17（Interleukin-17, IL-17）和白介素10（Interleukin-10, IL-10）水平，流式细胞术分析CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表达，并通过16S 核糖体脱氧核糖核酸（16S ribosome deoxyribonucleic acid，16SrDNA）测序技术检测分析脾虚型FD大鼠的肠道菌群，从而基于肠道微生态对T细胞免疫的影响，阐述脾虚型FD发病及参苓白术散治疗的内在机制。.重要结果：.1.参苓白术散中、低剂量组及模型组大鼠的血清D-木糖含量明显低于正常对照组(P<0.05)。高剂量参苓白术散组与正常对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。.2.模型组大鼠的血清IL-17水平较正常对照组升高(P<0.05)，参苓白术散高剂量组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。参苓白术散高剂量组血清中IL-10的表达明显高于正常对照组和模型组(P<0.05)。相较于模型组，参苓白术散高剂量组提高了肠系膜CD4+CD25+ Foxp3+T细胞比例(P<0.05)。.3.16SrDNA测序结果显示：脾虚型功能性腹泻模型组大鼠肠道微生物组成和正常对照组大鼠的距离较远，差异较大，而参苓白术散高剂量组肠道微生物组成与正常对照组的距离较近，差异较小。