参苓白术散调节小鼠肠道微生物-黏膜免疫的iNKT细胞机制研究

Allergic diseases have become important issues in clinical pediatrics, and modern medicine is still lack of ideal method. Traditional Chinese Medicine has exact effect on allergic disease of children with the method of strengthening spleen and eliminating dampness, while the mechanism is not clear yet. Recent researches suggested that iNKT cells, which mediate the intestinal microbiota and mucosal immunity, are closely related to the inflammation of allergic diseases. We speculate that early intervention with the method of strengthening spleen and eliminating dampness may help reduce inflammation of allergic diseases, through iNKT cells which mediating the intestinal microbiota and mucosal immunity. In this project, with mice models of allergic colitis and bronchial asthma as objects of the study, we will explore the early intervention with Shenlingbaizhu powder, the representative prescription of method of strengthening spleen and eliminating dampness, in relieving the inflammation of allergic colitis and bronchial asthma, and the roll of iNKT cells in it. Coupled with methods of metagenomics and DNA methylation, the pathway of intestinal microbiota- CXCL 16-CXCR 6 will be studied to testify the mechanism of Shenlingbaizhu powder on iNKT cells, and key microbes and functional genes will also be filtered out. The results will establish the foundation for further in-depth study on effect mechanism, and deepen the understanding of the theory of ‘lung related to spleen’and the application of ‘strengthening earth to generate metal’.

过敏性疾病日渐成为儿科临床面临的重要课题，现代医学尚缺乏理想防治方法。中医健脾化湿法防治过敏性疾病有确切疗效，但其机制尚未明确。最近研究提示，iNKT细胞介导的肠道微生物-黏膜免疫失调，与过敏性疾病炎症反应的发生密切相关。我们猜想，健脾化湿法早期干预可通过调节iNKT细胞介导的肠道微生物-黏膜免疫，减轻过敏性疾病炎症反应的发生。本项目拟分别以过敏性结肠炎和支气管哮喘模型小鼠为研究对象，研究健脾化湿法的代表方剂——参苓白术散，早期干预以减轻过敏性结肠炎和支气管哮喘炎症反应的作用，及其与iNKT细胞的关系。还拟结合宏基因组学、DNA甲基化等实验方法，验证参苓白术散是否通过肠道微生物—CXCL 16—CXCR 6的途径，影响体内iNKT细胞水平，并分析其可能作用的关键微生物及其功能基因。研究结果将为深入的疗效机理研究建立基础，并深化对中医“肺脾相关”理论的认识和“培土生金”治法的应用。

过敏性疾病日渐成为儿科临床面临的重要课题，现代医学尚缺乏理想防治方法。中医健脾化湿法防治过敏性疾病有确切疗效，但其机制尚未明确。我们猜想，健脾化湿法早期干预可通过调节iNKT细胞介导的肠道微生物-黏膜免疫，减轻小儿过敏性疾病炎症反应的发生。本项目根据疾病活动指数评分（DAI）、结肠组织病理观察及评分（HPS），发现参苓白术散的早期干预，虽减轻了噁唑酮诱导的幼鼠结肠过敏性炎症，但却未如原猜想那样降低IL-4、IL-13等过敏性炎症因子含量，也未影响iNKT细胞及分泌IL-4、IL-13的iNKT2细胞亚群水平，但却提高了抑制过敏性炎症的IL-10、IFN-γ含量。参苓白术散的早期干预，能显著减轻卵蛋白诱发的支气管哮喘幼鼠气道炎症反应，并减少支气管灌洗液中嗜酸性粒细胞比例、IL-4含量及肺组织中OVA-sIgE水平；还显著增高肺iNKT细胞频率，但对主要分泌IL-4的iNKT2细胞亚群则无明显影响。研究还发现，参苓白术散的早期干预可影响哮喘幼鼠的肠道微生物，并筛选出部分相关菌种及功能基因，但对结肠CXCL16基因的表达及其平均甲基化水平则无明显影响，在幼鼠外周血或脾的样本中也未检测到iNKT细胞，这说明其对肠道微生物的影响，并非通过CXCL16—CXCR6途径来调控肺iNKT细胞。本项目通过动物实验，证实参苓白术散的早期干预，能显著减轻哮喘幼鼠的过敏性炎症反应，且其作用可能与抑制IL-4的分泌相关，而其减轻过敏性结肠炎的作用，则与IL-4或IL-13无明显相关性，但两者都应非通过iNKT细胞所介导。本项目还以UHPLC-QE-MS非靶标法鉴定出参苓白术散的主要生物活性成分，并运用计算机网络药理学和分子对接技术探索其相关作用机制。这些都将深化对中医“肺脾相关”理论及“培土生金”治法的认识。