古菌Hjm解旋酶参与复制叉回退和Holliday junction加工的机制

DNA解旋酶是重组修复和停滞复制叉再启动过程中的关键酶。Hjm/Hel308a是古菌中新近发现的DNA解旋酶,在重组修复过程中的具体功能和作用机制尚不清楚。前期研究中我们鉴定了硫化叶菌Sulfolobus tokodaii中Hjm/Hel308a的同源蛋白StoHjm,发现它具有类似细菌RecG双向解链和复制叉回退功能。体外StoHjm可与Holliday junction (HJ)专一性内切酶Hjc共同作用，切割产生的HJ。更有趣的是,这种切割呈现出多位点和不连续性。本项目拟利用不同的反应底物,分析在StoHjm和Hjc协同作用下切割HJ的结构和底物特异性。利用限制性蛋白酶降解、缺失突变和pulldown等分析技术，研究二者相互作用的结构区域,确认StoHjm与PCNA和Rad55同源物的相互作用，从而进一步揭示Hjm/Hel308a解旋酶产生和加工HJ的机制及其在古菌重组修复中的功能。