抗恶性肿瘤CD176多价小型化重组抗体的构建及生物学活性的研究

研发抗肿瘤重组抗体药物，是生物技术药物的重点之一。经过长期系统、系列的研究，我们发现CD176表达于多种恶性肿瘤及肿瘤干细胞，但不表达于成年人正常组织。 最近我们发现CD176抗体诱导CD176阳性肿瘤细胞凋亡。动物实验证实，在体内CD176抗体也可诱导CD176阳性肿瘤细胞凋亡并对实验动物有治疗作用。本项目中，我们将应用重组抗体技术，将二、三、 四个scFv连接在一载体蛋白上，构建二、三、 四价小型化CD176重组抗体，并对所获重组抗体的特异性、亲和力、抗肿瘤活性（诱导肿瘤细胞凋亡和阻止细胞粘连）、体内稳定性（体内半衰期）、体内分布、代谢特点、肿瘤分布、体内药效学进行评价和比较。目的是：1）获得成药性好的CD176小型化重组抗体，并尽早申报专利以保护知识产权；2）为小型化抗体药物的研究提供理论和实践积累。

在本项目中，我们首先研究CD176抗体诱导白血病细胞凋亡的分子机制。我们发现, CD176抗体结合在细胞表面凋亡相关糖蛋白（如：CD95、DR4等）的CD176糖链上， 而激活凋亡通路，导致CD176阳性白血病细胞凋亡。 CD176抗原表达于白血病细胞表面，但不表达于人类正常组织，CD176分子是潜在的抗肿瘤生物治疗新靶点。随后，我们在动物实验证实，用CD176抗体处理小鼠，对带CD176阳性白血病细胞的小鼠有较好治疗作用，包括明显降低肿瘤细胞肝和脾转移，骨髓肿瘤细胞明显减少，显著性延长带瘤小鼠的生存时间等。这进一步证实，研发CD176抗体新药有较好的临床前景。其后，作为工作重点，我们应用分子生物学技术，成功制备几个CD176重组抗体并进行生物学活性的研究：1）经过长期、大量工作，由数万个克隆，经多轮筛选，我们获得高特异性和高亲和力的CD176 单链可变区（scFv）；2）我们成功构建几个CD176小分子抗体，包括CD176 scFv-His tag，CD176双价scFv，以及CD176单链可变区-碱性磷酸酶重组复合蛋白（CD176 scFv-AP），并对这些CD176小分子抗体的特性进行鉴定；3）成功构建和获得CD176 scFv-Fc人源化抗体，经初步鉴定，该人源化抗体高特异性和高亲和力结合肿瘤细胞表面天然的CD176抗原，表现良好的成药前景。为研发新的抗恶性肿瘤新药，该人源化抗体的临床前研究已展开。