基于母血浆胎儿游离DNA产前诊断遗传性耳聋的方法学探索

产前诊断的原则为应尽可能早地做出诊断以及尽可能采用安全的介入性产前诊断方法。非侵入性产前诊断技术的开展和完善使得出生缺陷能够在胚胎发育的较早时期，安全、准确、快速地作出诊断，是今后产前诊断发展的趋势和重点。本研究拟建立高效的母血胎儿DNA抽提技术和母血胎儿游离DNA单基因病诊断实验模型，与我们已建立的高温连接酶检测反应-Universal芯片技术相结合，建立稳定特异的遗传病产前无创快速诊断芯片技术体系；并在遗传性耳聋家庭中验证检测方法的稳定性、特异性及灵敏度。旨在建立利用母血浆胎儿游离DNA非侵入性产前诊断遗传性耳聋的技术平台，最终初步建立操作简便、实用性强的产前无创快速诊断的临床应用指导体系。

传统的侵入性产前诊断不仅存在流产、感染等难以避免的风险，而且检测周期较长。发展安全、快速、准确的产前诊断技术是当前的发展趋势和研究重点。目前利用孕妇外周血中胎儿游离DNA的无创性产前诊断唐氏综合征的技术已逐步走向临床，但是由于胎儿DNA的含量低、孕妇外周血DNA背景混淆等问题的存在，单基因病的无创性产前诊断依然困难重重。为解决这一问题，在本项目执行过程中我们首先收集了约70个耳聋产前诊断家系血样（200余例样本）。基于先前建立的高温连接酶检测反应-Universal芯片技术，研究检测遗传性耳聋的常见位点，建立基于胎儿游离DNA的芯片平台和筛查软件。小样本的研究显示，这个平台仅需要一次性抽取5ml孕妇外周血，就可在一天内实现耳聋高危胎儿的筛查。与高通量测序相比，不仅操作简单，而且检测平台经济高效，适合未来临床的应用。同时研究还对原有的胎儿游离DNA的富集技术进行浓缩改良，为后续的检测技术打下了基础。这些为将来实现无创性检测单基因病奠定了坚实基础。