叶酸代谢酶类与卵巢上皮癌多药耐药关糸研究

在上一项国家自然基金项目研究中发现卵巢上皮癌铂类耐药与非耐药组织和细胞间存在差异表达叶酸代谢酶类基因与蛋白并与卵巢上皮癌耐铂类指数与预后相关。但其机理尚不清楚。本研究拟对已建立的铂类耐药细胞系、耐药荷瘤鼠模型以及卵巢癌患者组织和正常卵巢组织， 通过检测叶酸代谢酶类基因表达及NSP位点和蛋白表达水平，分析其与耐药患者临床病理的关系。采用ELISA法动态检测卵巢癌患者铂类药物化疗前后血中叶酸代谢酶美蛋白的含量，分析其与肿瘤复发和耐药形成的相关性。采用RNA干扰和以慢病毒为载体的体外基因转染技术探讨叶酸代谢酶类基因的阻断或开放对耐药细胞增殖生长、耐药指数、细胞内药物浓度的改变等生物学行为的影响。利用信号转导通路相关基因cDNA表达谱芯片观察叶酸结合蛋白基因在信号转导通路中的定位，阐明叶酸代射酶类在卵巢癌耐药过程的调控作用机制。

目的是探讨叶酸代谢酶类与卵巢上皮癌多药耐药关系。分别采用Real time PCR 和Western blot 检测80例卵巢恶性肿瘤组织、50例卵巢良性肿瘤组织及30例正常卵巢组织中的FOLR1、DHFR和MTRR表达情况，分析其与卵巢恶性肿瘤临床病理及多药耐药的相关性。采用体外实验的方法验证介导FOLR1、DHFR和MTRR表达或敲除FOLR1、DHFR和MTRR表达对卵巢癌细胞生物学行为及多药耐药的影响。结果显示：1、铂类药物耐药型卵巢恶性肿瘤中FOLR1呈低表达，在铂类药物敏感型卵巢恶性肿瘤中高表达；DHFR mRNA在铂类耐药组织中高表达(0.292±0.249)，在铂类敏感组织低表达(0.149±0.121)；MTRR在铂类药物耐药型卵巢恶性肿瘤中的表达量高于铂类药物敏感型（P﹤0.05）；在治疗后肿瘤进展者中的表达量高于缓解者（P﹤0.01）。2、FOLR1基因能增强卵巢癌SKOV3细胞的生长增殖能力；卵巢癌SKOV3细胞中FOLR1基因表达上调后顺铂对其抑制率增加，呈剂量-时间依赖关系，顺铂更容易诱导其凋亡发生，呈时间-剂量依赖关系，顺铂将其细胞周期中的S期阻滞明显增加。而DHFR过表达与卵巢癌顺铂的耐药性相关，DHFR的下调与经过铂类药物作用的体外卵巢癌细胞的药物耐药性有一定的联系，卵巢癌细胞中下调DHFR基因可以考虑作为多药耐药的逆转机制。