阳明病（阳明腑实证）“欲解时”与实验大鼠肠黏膜TLR4-MyD88-NFκB炎症信号通路变化及大承气汤干预研究

Team through the early stage of the National Natural Science Fund Project“Correlated Study on The Recovery of Tai yang Disease(Wind Cold Superficies Syndrome) and Interleukin”and “Correlation Study on the Recovery of (Spieen-Yang Deficiency Syndrone)and cAmp”, primarily studied inner link with the body's immune function and Taiyang disease occurrence and development regularity, explored the physiological pathology basis of Taiyin disease and the meaning of the recovery of disease. On this basis, this topic proposed correlation study of the recovery of disease of Yangming Disease (Yangming fu-organ disease) with the changes on TLR4-MyD88-NFκB inflammatory signaling Pathways of experimental rat’s intestinal mucosal,though the indicators changes of TLR2、TLR4、TLR9 and MyD88, and the expression changes of Inflammatory cytokines IL-6、TNF-α and NF-κB, to explore the physiological pathology basis of Yangming Disease (Yangming fu-organ disease); through the study of intervention effect with Da-Cheng-Qi Decoction, the team discussed the meaning of time therapeutics about Yangming Disease (Yangming fu-organ disease), providing experimental basis for comprehensive and in-depth interpretation the Scientific and objective with six channels syndrome.

课题组通过前期国家自然科学基金项目“太阳病（风寒表证）‘欲解时’与白介素节律变化的相关性研究”以及“太阴病（脾阳虚证）‘欲解时’与环磷酸腺苷的相关性以及理中汤干预研究”的课题，初步研究了人体免疫功能与太阳病发生、发展规律的内在联系，探讨了太阴病的生理病理基础以及欲解时的意义。在此基础上，本课题拟进行“阳明病（阳明腑实证）‘欲解时’与实验大鼠肠黏膜组织TLR4-MyD88-NFkB炎症信号通路变化的相关性研究”，通过实验大鼠肠黏膜TLR2、TLR4 和 TLR9及MyD88等指标的变化，以及炎性因子IL-6、TNF-α、NF-κB表达的变化，探讨阳明病（阳明腑实证）的生理病理基础；并通过大承气汤干预效果的研究，探讨阳明病（阳明腑实证）“欲解时”的时间治疗学意义，为全面而深入地阐释六经“欲解时”的科学性以及客观性提供实验依据。

本项目通过阳明病（阳明腑实证）模型大鼠在“欲解时”及其对应时段TLR2、TLR4、TLR9及MyD88等指标的变化，监测其下游炎性因子IL-6、TNF-α以及NF-κB的表达，探讨阳明病（阳明腑实证）的生理病理基础；并通过大承气汤干预效果的研究，探讨阳明病（阳明腑实证）“欲解时”的时间治疗学意义。研究结果：（1）在文献报道的阳明腑实证动物模型基础上，通过体温、白细胞计数及 IL-6含量的综合评价，确定5mg /kg 的 LPS 注射剂量为有效观察阳明腑实证病程变化模型的注射剂量；体温可作为判定阳明腑实证模型成功与否的一个简单而较客观的指标，其特点是先降低，至4-5 h后体温高于正常水平。（2）LPS作为TLR4的主要激活剂，主要是通过TLR4-MyD88-NF-κB途径启动阳明腑实证TLRs 信号途径的活化，影响IL-6、TNF-α等前炎症细胞因子表达，然后激活I-κB激酶复合物，最终导致NF-κB的活化，促进内毒素血症炎症反应的发生和发展。（3）非欲解时模型组和药物组TLR2、TLR4、TLR9、MyD88的蛋白表达大多高于欲解时模型组和药物组，推测欲解时TLRs对LPS的识别弱于非欲解时，甚至在疾病后期出现TLRs下调现象，以至相关炎症因子的释放减少，故而临床症状有所缓解，符合《伤寒论》中欲解时的内涵。（4）大承气汤干预对阳明腑实证模型大鼠TLRs有双向调节作用，表现为下调TLRs的高表达，上调TLRs的低表达，既避免强烈的免疫应激造成严重的炎症损伤，又可提高机体免疫能力抵抗病原的侵袭，更加有利于疾病恢复。（5）阳明腑实证模型大鼠造模成功后初期阶段，白细胞急剧升高，其中中性粒细胞迅速升高；后期以淋巴细胞为主。大承气汤在最开始虽然不能迅速改善白细胞计数，但可以影响白细胞不同类别计数及比率，向正常比值方向发展，可改善体内微环境。（6）阳明腑实证相关脏器形态学观察发现，模型大鼠小肠、肝、肺组织有不同程度的病理损害，呈现细胞水肿、坏死，炎性细胞浸润等，大承气汤干预后损伤程度减轻，与近年提出的肠道菌群介导的肠－肝轴、肠－肺轴理论吻合。