阳明腑实证大鼠肠神经－ICC-DMP－平滑肌网络信号转导通路障碍和通里攻下法干预机制

临床观察结果显示阳明腑实证患者存在严重胃肠运动功能障碍，通里攻下疗法能明显改善胃肠运动功能，有效地治疗阳明腑实证，但详细的机理还不清楚。最近研究证明小肠深肌丛中运动神经－深肌丛Cajal间质细胞（ICC-DMP）-平滑肌网络信号转导通路与胃肠运动密切相关。本研究应用免疫荧光组化双重或多重标记、原位细胞膜片钳技术、共聚焦显微镜观测、三维重建和免疫电镜检测等技术；以阳明腑实证大鼠为研究对象，在小肠运动神经形态、ICC-DMP功能和形态、肠神经-ICC-DMP间递质受体/信号转导和ICC-DMP-平滑肌细胞间的缝隙连接等多个层面上；从形态、功能和细胞间通讯的角度；观测阳明腑实证大鼠小肠运动神经-ICC-DMP-平滑肌递质受体/信号转导通路变化和通里攻下法的代表方剂-大承气汤的干预作用。探讨阳明腑实证胃肠运动功能障碍本质和通里攻下法治疗阳明腑实证机理；为大承气汤的进一步开发和推广应用奠定理论基础。

以阳明腑实证大鼠为研究对象，在小肠运动神经形态、ICC功能和形态、肠神经-ICC间信号转导和ICC -平滑肌细胞间的缝隙连接等多个层面上；从形态、功能和细胞间通讯的角度；观测阳明腑实证大鼠小肠运动神经-ICC-平滑肌信号转导通路变化和通里攻下法代表方剂-大承气汤的干预作用。. 结果显示，阳明腑实证大鼠小肠神经末梢明显肿胀，神经递质小泡减少或消失；胆碱能神经/氮能神经神经/肽能SP神经/VIP神经纤维数目明显减少；彼此间的连接减少，神经网络结构紊乱；神经网络的荧光强度减弱。服大承气汤后神经组织末梢较为丰富，少量神经末梢肿胀，神经递质小泡无明显减少; 胆碱能神经/氮能神经神经/肽能（SP）神经/VIP神经神经纤维数目明显增加；彼此间网络连接完整性明显恢复。阳明腑实证大鼠小肠ICC数量明显减少，细胞荧光强度明显减弱，彼此之间网络样结构不完整。细胞形态欠规则，细胞膜周围小凹减少。线粒体水肿严重，光面与粗面内质网均明显减少。高尔基体数量下降，中间丝模糊。明显可见细胞核周核纤层增宽，染色质边集异常。可见大量凋亡的ICC。大承气汤组可见ICC线粒体水肿不明显，内外膜均较完整。光面内质网丰富，高尔基体数量增多。中间丝清晰，且含量丰富。核纤层无明显改变，染色质边集典型。凋亡的ICC明显减少。阳明腑实证组ICC与肠神经纤维间的连接松散或消失，网络结构不完整，肠神经－ICC网络结构遭受明显破坏。ICC与肠神经纤维间的连接接近正常，ICC－肠神经网络结构明显恢复。阳明腑实证组大鼠肠平滑肌细胞粗面内质网扩张，高尔基体肿胀，出现大量细胞膜内陷空泡，相互间的缝隙连接缺失。大承气汤组大鼠平滑肌细胞损伤不明显，有少量细胞膜内陷空泡。阳明腑实证大鼠小肠ICC-平滑肌网络缝隙连接蛋白Cx43减少，细胞通讯功能蛋白减少。大承气汤治疗后，大鼠小肠肠肌层中ICC-平滑肌网络缝隙连接蛋白Cx43增多，透射电镜发现ICC-平滑肌细胞之间缝隙连接间隙接近正常。.本研究率先以与肠神经-ICC-平滑肌网络为对象，从形态和细胞间通讯的角度，观察了阳明腑实证大鼠肠神经-ICC-平滑肌网络信号转导通路变化和大承气汤干预机制。初步探讨了阳明腑实证病理生理改变本质，丰富脾胃学说科学内涵，为大承气汤进进一步开发和推广、应用奠定理论.发表学术论文5篇，2篇被SCI收录。3人次参加全国学术会议进行交流。培养博士1名，硕士2名。