原发性胆汁性肝硬化中miR340/Ascl2/CXCR5/Tfh细胞轴的调控作用及机制研究

Primary biliary cirrhosis (PBC) is an autoimmune liver disease difficult to treat. The pathogenesis remains unclear. Recent studies showed that Ascl2 could promote CXCR5 expression and follicular helper T (Tfh) cells development. Our previous studies showed that, Tfh cells increased and microRNA 340 (miR340) decreased in autoreactive T cells significantly in PBC patients; miR340 could inhibit expression of Ascl2. Therefore, this project aims to explore the regulation and mechanism of miR340/Ascl2/CXCR5/Tfh cells axis in PBC:①investigate regulation mechanism of miR340 on auto-reactive T cell and Ascl2, CXCR5 in PBC; ② Study the effect of DNA methylation and histone modifications on miR340 expression, Ascl2, CXCR5 and cells function; ③ Through intervention of miR340, Ascl2, CXCR5, BCL6 and ICOS and other regulatory pathways, investigate regulation mechanism of miR340/Ascl2 / CXCR5/Tfh axis in autoimmune-like lesions in PBC mouse models. This will help to further understand the pathogenesis of PBC, and provide a theoretical basis to explore new ways of immune intervention therapy for PBC.

原发性胆汁性肝硬化(PBC)是一种自身免疫性肝病，治疗棘手，发病机制尚不明确。新近研究表明，Ascl2促进CXCR5表达进而促进滤泡辅助性T（Tfh）细胞发育。前期研究发现PBC患者Tfh细胞显著增高，自身反应性T细胞中microRNA 340(miR340)显著降低；miR340可抑制Ascl2表达。在此基础上，本课题拟研究PBC中miR340/Ascl2/CXCR5/Tfh细胞轴的调控作用：①研究miR340对PBC 自身反应性T细胞的调控及Ascl2、CXCR5的作用机制；②研究DNA甲基化、组蛋白修饰等对miR340、Ascl2、CXCR5表达以及细胞功能的调控机制；③通过干预miR340、Ascl2、CXCR5、BCL6和ICOS等调控途径，研究PBC小鼠模型中miR340/Ascl2/ CXCR5/Tfh细胞轴对自身免疫病变的调控作用，为探索有效免疫治疗提供理论依据。

本项目已达到预期目的，完成SCI论文16篇，国内核心期刊论文25篇。.（1）分别设计并合成miR340/Ascl2/CXCR5/Bcl6 shRNA或过表达序列，制备慢病毒。感染PBC自身反应性T细胞并鉴定感染效率。.与空载组相比，miR340在miR340-shRNA组中表达下降0.5倍，在慢病毒过表达组中增高12.5倍；Ascl2在Ascl2-shRNA组中表达下降0.46倍，在慢病毒过表达组中增高9.8倍；CXCR5在CXCR5-shRNA组中表达下降0.52倍，在慢病毒过表达组中增高7.4倍；Bcl6在Bcl6-shRNA组中表达下降0.44倍，在慢病毒过表达组中增高10.2倍。.(2).“上下调”miR340 表达对 PBC 自身反应性 T 细胞功能及其表达 Ascl2/CXCR5的影响。.miR-340前体刺激可降低自身反应性T细胞增殖功能、细胞毒活性，而miR-340抑制体则相反，miR-340对自身反应性T细胞的增殖功能、细胞毒性具有调控作用，可以调控TNF-α，IFN-γ等细胞因子的产生，影响Ascl2/CXCR5的表达。miR340部分通过Ascl2调控对自身反应性T细胞CXCR5的表达。.(3).构建 PBC小鼠模型及miR340/Ascl2/CXCR5/Bcl6 差异表达PBC小鼠模型.miR-340可能抑制 polyI:C 诱导的小鼠肝组织 PBC 样病变，miR-340可能抑制 polyI:C 诱导的小鼠肝组织 PBC 样病变。.(4).miR-340/Ascl2/CXCR5 差异表达的 PBC 小鼠模型.miR-340在poly I:C 诱导产生 AMA的负调节作用由Ascl2/CXCR5介导；miR-340抑制 polyI:C 诱导的小鼠肝组织 PBC 样病变被Ascl2/CXCR5部分阻断；miR340通过Ascl2/CXCR5介导对PBC小鼠模型分泌细胞因子的调控；miR-340部分通过Ascl2/CXCR5调控PBC小鼠模型Tfh细胞比例。.(5).研究调节miR340表达的表观遗传学修饰对PBC自身反应性T细胞功能的调节作用及其作用信号通路。.FoxO3a能够明显促进miR340启动子的转录活性，促进miR340的表达。