原发性胆汁性肝硬化中miR-20a对Th17/Treg平衡的调控作用研究

原发性胆汁性肝硬化（PBC）是一种自身免疫性肝病，发病率逐年升高，发病机理尚不明确，因此，深入研究PBC发病机制和调控途径，具有巨大的应用前景和学术价值。研究表明，PBC中自身反应性T细胞起着重要作用；在PBC患者中存在Treg/Th17平衡失调；IL21异常表达可能导致Treg/Th17细胞失调，在自身免疫性反应中起关键作用。本研究前期证实：PBC中miR-20a显著降低，IL21表达显著增高，miR-20a可与IL21基因3'UTR区相互作用。在此基础上，本课题拟通过基因沉默实验研究IL21对自身抗原特异性Treg/Th17分化的调节作用；进而通过转染miR-20a前体或抑制体，研究miR-20a对IL21 表达和Treg/Th17细胞分化的调控机制；最后在PBC动物模型上探讨miR-20a的体内调节效应，为探讨治疗PBC的新途径提供依据。

课题按计划完成。已发表专业论文20篇，其中SCI论文8篇。研究主要结果如下：.(1) 研究IL-21对PBC Th17细胞 / Treg细胞分化的作用。IL-21可增强IL-6刺激诱导的Th17细胞分化， Th17+细胞比例从72.5%增至85.5%(p＜0.05)，IL-17mRNA和RORγt mRNA相对表达水平均上升(P＜0.05)；IL-21可抑制CD4+T细胞向Treg细胞方向的分化，IL-21共同刺激培养使Treg细胞比例从6.51%降至3.53%,Foxp3 mRNA相对表达水平从3.65降至1.45 (P＜0.05)。在IL-6刺激下，CD4+ T细胞向Th17细胞分化；在TGF-beta刺激下，CD4+ T细胞向Treg细胞分化。IL-21可抑制Foxp3的表达，减少CD4+T细胞分化形成Treg细胞，而促进Th17细胞分化。.(2) 研究miR-20a通过调控IL-21表达进而影响PBC Th17细胞或Treg细胞分化及其机制。. 结果显示，IL-21 可通过增加IL-17 和RORγt表达从而促进Th17 细胞分化；另一方面，miR-20a可抑制IL-21和IL-17表达，促进Treg 细胞分化，抑制Th17 细胞生成。因此，在细胞水平的研究表明，miR-20a可调控IL-21表达，调节CD4+T 细胞向Treg分化。miRNA 20a前体刺激可降低IL-21 mRNA表达水平，降低Th17+细胞分化的作用，可降低IL-17mRNA和RORγt mRNA表达水平，Th17细胞比例从72.5%降至49.8%(p＜0.05)；转染了miRNA 20a前体的细胞转录因子NF-κB活性减少，提示miR-20a可能通过调控转录因子NF-κB的水平来调控PBC Th17细胞功能的变化。MiR-20a前体可促进CD4+T细胞向Treg细胞分化，使Treg细胞比例从3.63%增至7.51%(P＜0.05)。.(3) 研究PBC模型中miR-20a的体内调控效应。miR-20a可抑制 poly I:C 诱导的小鼠肝组织 PBC 样病变；注入pAd-miR-20a＋polyI:C的实验组小鼠其Th1与Treg细胞比例较PBC模型组小鼠显著增高，Th17细胞比例显著下降，表明miR-20能够调节PBC模型的Th17/Treg失衡。