microRNA在原发性胆汁性肝硬化患者PDC-E2反应性CD8+T细胞中调控机制的研究

Primary Biliary cirrhosis is a typical organ-specific autoimmune disease,high incidence, unconstant symptom and lack of efficient drug impose the big burden on the quality of patient's living and the society medical system.Now,it remains unclear of the etiology and the accurate mechanism of PBC. It is suggested that the combination of susceptible genetic background, environmental triggers and abnormal immune reaction lead to the initiation and promotion of this disease. Antigen reaction T cell is shown to play a important role in the pathogenesis, especially in immune-pathological destruction. Antigen reaction T cell may be involved in several process including the specific destruction of biliary epithelial cell; In previous study, our lab has found several expressed differentially microRNA in PBMCs of patient with primary biliary cirrhosis. However, the role of microRNA in antigen reaction T cell is not clear. Therefore, the present study plans to study the influence of microRNA on self-antigen reaction T cell, which is beneficial to seeking new therapy strategies and methods. So, this study has high science value and promising practice.

原发性胆汁性肝硬化是一类典型的器官特异性的自身免疫性疾病，高的发病率、多变不一的临床症状以及缺乏有效的治疗药物使该病对患者个人的生活质量以及整个社会的医疗保健系统都造成了巨大的威胁。对于该病的发病原因及具体的发病机制，至今还未十分清楚；当前认为易感的基因遗传背景、外源环境刺激以及异常的免疫反应共同导致了PBC的发生，而自身抗原反应性T细胞的活化是自身免疫致病机理的关键，由其介导的免疫反应参与了包括胆管上皮细胞的特异性损伤在内的许多免疫病理过程。前期本实验室研究发现在PBC患者中存在许多异常表达的miRNA分子，这些miRNA分子参与调控了PBC的发病过程；但对于PBC患者自身抗原反应性CD8阳性T细胞中miRNA的调控机制并未阐明，因此，本课题拟研究PBC中miRNA在自身抗原反应性T细胞活化过程中的具体调控机制，为进一步探讨免疫干预治疗PBC提供实验基础，具有重要的科学价值与应用前景。

原发性胆汁性胆管炎（PBC）是一类器官特异性的自身免疫性疾病，丙酮酸脱氢酶复合物E2亚基是其主要自身抗原成分，而自身抗原反应性T细胞与PBC的发生、发展密不可分，PBC患者肝脏中浸润的大量自身反应性CD8+T细胞与中小胆管损伤密切相关。CD8+T细胞的增殖、存活与凋亡水平决定了机体免疫系统是否损伤胆管上皮细胞以及其损伤程度，从而影响该类疾病的发生与发展。已有研究证实miRNA可参与调控CD8+T细胞的活化、分化、增殖及凋亡等一系列生物学活动进而影响PBC的进展。在本课题前本研究团队发现PBC外周血单个核细胞和T细胞中miRNA表达谱存在异常且这种异常表达miRNA参与了PBC发病机制，然而目前对于自身反应性CD8+T细胞中miRNA的表达情况以及差异表达的miRNA该类细胞生物学活动的调控机制仍不太了解。本项目通过检测PDC-E2反应性CD8+T细胞中miRNA表达变化，对miRNA调控该类细胞凋亡过程的潜在机制进行了详细的研究。结果发现：（1）PDC-E2反应性CD8+T细胞中miR-223-3p表达下调，CD8+T细胞凋亡减少。（2）miR-223-3p在PDC-E2反应性CD8+T细胞中的表达与细胞凋亡之间的关系为正相关，转染miR-223-3p的模拟体可促进CD8+T细胞凋亡，而转染miR-223-3p的抑制体则抑制细胞凋亡，说明PDC-E2反应性CD8+T细胞中miR-223-3p可调控细胞凋亡。（3）通过多个网站预测miR-223-3p的靶基因并选择与凋亡相关的靶基因IGF-1R，并从基因、蛋白水平验证靶点。设计并合成IGF-1R的siRNA来沉默IGF-1R，发现转染siRNA以后，PDC-E2反应性CD8+T细胞凋亡增加。说明PDC-E2反应性CD8+T细胞中miR-223-3p以IGF-1R为靶点对细胞凋亡起正向调控作用。该研究为进一步阐明了miRNA在PBC发病机制中的作用，将为临床治疗PBC提供新的免疫学思路。