应用个体化脑肿瘤干细胞（BTSC）靶向免疫治疗同源胶质瘤实验研究

Brain tumor stem cells (BTSC) are closely related to the genesis and recrudescence of malignant glioma. This study will be focus on targeting at the BTSC decresing, based on our primary researches. The BTSC, which were from personal glioma and processed as normative cellular line, were fused with dendritic cells (DC) from vein blood of the homologous individual at different ratio in order to establish the DC-BTSC hybridoma vaccine, following the radiation with 50Gy.`In study in vitro,the killing effect of T lymphocytes (TLC) on the homologisation glioma cells was evaluated by assaying interferon (IFN-γ)following TLC activation with BTSC+DC. The model rats loaded with the homologous glioma were inputed with the DC+BTSC at different rates. Some indexes including tumor imagiology, secretion of IFN-γ, morphology of focal tissue, and dynamic state of immunohistochemistry were respectively oberserved, inorder to evaluate the decreasing degree of glioma in vivo and to explore the mechanism. The aim of this research is to establish a new strategy about targating immunotherapy on glioma with BTSC, which will provid the experiment data for personal therapy and anti-recidivation of glioma in clinic. At equal pace, the individual BTSC line will be established for storage.

脑肿瘤干细胞（BTSC）的存在与恶性脑胶质瘤的发生发展及复发密切相关。本实验拟在本课题组已有前期工作基础上，以靶向消减BTSC为目的，将源于个体胶质瘤组织并规范建系及50Gy照射过的BTSC、以不同比例与同源个体静脉血树突状细胞（DC）融和，建立DC-BTSC杂交瘤苗；体外研究主要以干扰素（IFN-γ）表达为评估指标，检测经"BTSC+DC"融合细胞活化的T细胞对同源原代胶质瘤细胞杀伤作用；体内研究以负载与BTSC同源胶质瘤的模型大鼠为治疗研究对象，分别输注不同比例但来自相同个体的"BTSC+DC"融合细胞，在输注后的不同时间点，以肿瘤影像学、IFN-γ分泌、局部组织形态学及免疫组化变化等为主要指标，分组对应观察荷瘤大鼠胶质瘤的消减程度并探索其机制。旨在为针对BTSC 的个体化胶质瘤治疗及防复发应用提供可借鉴实验数据，探讨BTSC 靶向免疫治疗胶质瘤新策略。同步将对个体化BTSC建系存留.

在本基金（同时借助其他相关基金经费）资助下，项目按计划完成相关研究内容。实验对胶质瘤及其干细胞的部分生物学特性和相关机制进行了研究，利用胶质瘤及其干细胞生物学特性进行免疫学治疗方面研究，以及鼠来源免疫细胞（树突状细胞、T细胞）的分离、鉴定、培养，肿瘤/肿瘤干细胞环境对免疫细胞的影响实验方面获得了相关实验结果。研究表明：（1）树突状细胞在肿瘤环境中可发生形态学改变；（2）应用流式分选法，可有效获得CD80+的DC、CD3+的TLC；（3）Notch2蛋白通路在BTSC的生长和侵袭调节方面具有重要作用。通过转染MicroRNA-107，可以抑制BTSC的Notch2通路，从而抑制其生长和侵袭；（4）在普通胶质瘤细胞中， MicroRNA-107也可通过作用Notch-2、CDK6等靶基因来抑制肿瘤细胞的生长、迁移、侵袭；（5）颅内疾病中，可通过减少促炎性细胞（小胶质细胞/巨噬细胞）的浸润，而降低促炎症因子的产生、正性影响颅脑损伤修复。相关研究成果发表SCI论著6篇，深入实验研究尚在进行中。获得2013年广东省自然科学基金重点项目1项（项目名称：个体化脑肿瘤干细胞靶向免疫治疗同源胶质瘤的实验研究；基金号：S2013020012754）。毕业博士生4名，在读博士生8名、硕士生3名。2013年有2名毕业博士生获得国家基金青年项目资助、3名博士生荣获国家优秀博士生奖学金。培养青年技术骨干3人。项目负责人应邀参加第五届世界华人神经外科学大会并大会讲演、担任分会场座长工作1次。