基于“功能药对分析模式”研究逍遥散抗抑郁作用的BDNF/HPA/cytokines靶位整合调节机制

As a classic prescription of soothing Liver-Qi stagnation, Xiaoyao Powder has definite anti-depression effect. The pathogenesis of depression involves the function disorder of BDNF/HPA/cytokines system and many pathological targets. Themodel of function- group analysis is an important method for explaining theinteger effect mechanism of Chinese medicinal formula potency. Our previous data indicated that the anti-depression action of Xiaoyao Powder was closely associated with the regulation of central neurotransmitter and the BDNF/TrkB signaling.pathway.We propose a hypothesize that Xiaoyao Powder exerts the anti-depression efect through the BDNF/HPA/cytokines system which is regulated by the different effects of different function-group in prescription In this study, our investigation will focus on the  BDNF/HPA/cytokines system related integration mechanisms of anti-depression effect of Xiaoyao Powder. We will useing the model.of function-group analysis, the method of behavioral pharmacological measures,fluorescent quantitative PCR, Western blot, ELISA, data mining and network modeling based on the rat model of CUMS. The results would support its application in clinical settings and provide novel insight into the approach of research on the principle of Chinese medicinal formula.

逍遥散是疏肝解郁经典名方，具有确切抗抑郁作用。抑郁症的发生与神经-内分泌-免疫系统紊乱密切相关，具有复杂的病理靶位。“功能药队分析模式”是深入揭示方剂整体作用原理的重要方法。本课题组前期的大量研究证明逍遥散抗抑郁作用与调节中枢神经递质、调控BDNF/Trk.B信号通路等密切相关。基于此，本次提出“逍遥散不同功能药队具有干预不同病理靶位效应，其抗抑郁作用是通过不同功能药队的BDNF/HPA/cytokines靶位整合调节实现的”工作假说，拟运用功能药队分析模式，以逍遥散及其功能药队为研究对象，以CUMS大鼠模型为评价载体，采用行为药理学、分子生物学、数据挖掘、网络建模等方法与技术，研究逍遥散不同功能药队抗抑郁作用的不同靶位，揭示逍遥散抗抑郁作用的神经-内分泌-免疫系统整合调节机制，为其临床运用提供更丰富的科学依据，并为方剂作用原理研究探索新的模式和提供新思路。

本项目研究是基于逍遥散功能药对拆方研究得到的精简方（柴胡、当归、薄荷），具有与逍遥散全方相当的抗抑郁作用。本研究主要以CUMS大鼠模型为载体，验证逍遥散全方与拆方药队的抗抑郁作用，探讨其抗抑郁作用的BDNF/HPA/cytokines靶位整合调节机制。.该项目研究中主要观察逍遥散及拆方药队对CUMS大鼠行为学指标的影响；采用分子生物学实验测定大鼠皮质、海马HPA轴和BDNF通路变化。采用Pearson相关性分析评价CUMS大鼠抑郁样行为与模型大鼠BDNF通路和HPA轴的相关性。另外，本次研究采用体外建立体外细胞抑郁模型以及侧脑室注射LPS诱导建立抑郁症大鼠模型对逍遥散抗抑郁作用部位以及作用机制进行了进一步的探讨。.研究结果显示：逍遥散全方及逍遥散拆方药队能显著改善CUMS大鼠的抑郁样行为；可明显提高模型大鼠血清、皮层与海马的BDNF水平及血清TrkB、CREB水平，上调皮层与海马部位BDNF、TrkB、CREB mRNA和蛋白表达水平，促进CREB磷酸化；抑制CUMS大鼠肾上腺指数的增加，对模型大鼠血清、皮层与海马部位Cort水平以及血清ACTH、CRH含量的异常升高均有对抗作用，能逆转模型大鼠皮层与海马部位GR mRNA和蛋白表达水平的降低；相关性分析表明：CUMS大鼠抑郁样行为的强弱程度与大鼠肾上腺指数、血清Cort、ACTH、CRH水平呈正相关，与海马部位BDNF含量、海马BDNF、TrkB、CREB、GR mRNA相对表达量、CREB磷酸化水平呈负相关；CUMS模型大鼠血清中Cort、ACTH、CRH水平与BDNF、TrkB、CREB水平成负相关，海马中GR mRNA相对表达量与BDNF、TrkB、CREB mRNA相对表达量和CREB磷酸化水平呈正相关。.体外细胞抑郁模型发现，逍遥散石油醚部位可对抗细胞损伤。采用侧脑室注射LPS诱导建立抑郁症大鼠模型表明，逍遥散能明显增加大鼠抑郁样行为，显著降低大鼠血清、皮层和海马中IL-6、TNF-α含量表达，上调5-HT1A mRNA表达水平。.本次研究发现逍遥散拆方药队具有与逍遥散全方类似的抗抑郁作用，其作用机制与下调HPA轴功能亢进、上调BDNF-TrkB-CREB水平相关。同时还与对抗炎性神经损伤作用有关，该结果对拓展逍遥散神经药理作用研究范畴，同时为阐释其抗抑郁作用的发挥提供新的科学依据。