自噬在补体及HBx蛋白介导的足细胞损伤中的作用及其调控机制研究

乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）是我国儿童最常见的继发性肾小球疾病之一，部分患者临床症状可持续存在，甚至最终进展至ESRD。"足细胞损伤"为其发病的中心环节，并与之预后密切相关，因此，探讨足细胞损伤应答机制对于深入认识该病的发病机理及改善预后具有十分重要的意义。我们前期工作发现HBV-GN患儿足细胞的自噬反应明显活跃，而自噬是关乎足细胞生存的重要损伤应答机制。本课题以HBV-GN两大发病机制为主线，拟通过建立补体攻击的细胞、动物模型及补体与HBx复合作用的细胞模型，利用电镜、共聚焦显微镜、RNAi、westernblot等手段，探讨自噬在免疫介导性足细胞损伤中的作用，及介导自噬反应发生的细胞内机制；并进一步探讨HBx蛋白与补体协同作用对足细胞自噬反应的影响，以及受损细胞的最终命运，以阐明自噬在HBV-GN足细胞病变过程中角色，为深入认识HBV-GN发病机制及探寻新的治疗措施提供依据。

乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）是我国儿童时期最常见的继发性肾小球疾病之一，部分患者临床症状可持续存在，甚至进展至ESRD。HBV-GN最常见的病理类型为膜性肾病（MN），“足细胞损伤”为其发病的中心环节，并与之预后密切相关，因此，探讨足细胞损伤应答机制对于深入认识该病的发病机理及改善预后具有十分重要的价值。自噬是关乎足细胞生存的重要损伤应答机制，而我们前期工作也发现HBV-GN患儿足细胞的自噬反应明显活跃。故而本项目以此为切入点，通过构建passive Heymann nephritis模型，发现足细胞自噬在PHN病变过程中扮演保护性角色；在此病理状态下足细胞自噬的活跃可能是由免疫损伤导致的内质网应激所诱导；在病变过程中，适当增强自噬可以在一定程度上减轻足细胞病变、缓解蛋白尿。我们继而通过构建亚溶量补体sC5b-9攻击足细胞的离体模型，发现在亚溶量补体所介导的足细胞损伤过程中，自噬发挥细胞保护性角色；使用雷帕霉素增强自噬可减轻sC5b-9诱导的足细胞病变。从而在细胞水平进一步明确自噬在免疫介导足细胞损伤的病理过程中发挥细胞保护作用。此外，我们还通过构建携带HBx基因的腺病毒载体转染足细胞，发现HBx蛋白可以通过调控细胞周期蛋白cyclin B1、p21、cyclin A的表达导致细胞周期出现G2/M阻滞，进而限制足细胞增殖能力。上述研究结果阐明了自噬在MN足细胞病变过程中的细胞保护性角色，内质网应激介导了免疫损伤所触发的细胞自噬的发生，以及HBx蛋白抑制足细胞生存能力，为深入认识HBV-GN发病机理及探寻新的治疗措施提供依据。