基于VHL综合征家系研究miRNA与罹患肾透明细胞癌的关系

目前关于miRNA与肾癌的研究很多，但究竟哪些miRNA在其中起关键作用？VHL综合征有70%的肾癌患病率，我们通过对比分析VHL综合征患者缺失突变的染色体区域，发现该区域附近包含miR-378在内的多个miRNA序列。同时我们前期在散发性肾透明细胞癌组织中的研究发现miR-151,miR-30等多个miRNA在肾透明细胞癌中明显表达异常，miR-30通过抑制Dlt-4的表达抑制血管内皮细胞增殖，miR-34a通过抑制Notch-1的表达抑制肾癌细胞的增殖。为进一步确定这些miRNA与肾透明细胞癌的关系，找到关键miRNA用于诊断或治疗靶点，我们拟通过VHL综合征家系成员血清miRNA表达谱的检测，分析透明细胞癌患者与健康成员间差异表达的miRNA。其次通过在大量散发性肾透明细胞癌组织中的验证，分析这些miRNA和发病、预后和复发等各因素间的关系，并进一步研究其在肾透明细胞癌中的致病机制。

VHL-HIF通路被认为是CCRCC发生的主要机制，但只有60%左右的患者存在此通路的改变，而且针对此机制下游VEGF的靶向治疗效果不理想。本课题拟基于前期收集的VHL综合征家系血清，检测透明细胞癌中的差异miRNA并探索其在肾透明细胞癌（CCRCC）中的作用。探索VHL-HIF通路之外在CCRCC发生发展中发挥重要作用的机制，寻找CCRCC的其他治疗靶点。但由于课题实施过程中血清miRNA芯片的检出率过低，改用散发性肾透明细胞癌组织和瘤旁组织标本。后期选用了15对VHL（-）的CCRCC组织标本和对应的瘤旁组织、15对VHL（+）的CCRCC组织标本和对应的瘤旁组织进行miRNA芯片检测，结合已有的和肿瘤发生相关miRNA的文献报道和芯片结果，选择了18个异常低表达的miRNA和22个异常高表达的miRNA进行细胞愈合实验筛选，最终：（1）探索了miR-185在VHL调控下对CCRCC的作用和作用机制；（2）选择了miR-204-5p研究其在VHL（+）的CCRCC发生中的作用。其中研究发现，miR-185在CCRCC中表达异常降低， miR-185通过负向调节于VEGFA的表达，抑制CCRCC的增殖并促进肿瘤的凋亡，miR-185的表达与肿瘤的大小、fuhrman 核分级、TNM分期呈明显负相关。miR-204-5p同样在CCRCC中异常低表达，其在VHL（+）的病例中能通过非VHL-HIF途径引起CCRCC的发生，通过裸鼠体内实验证明其可以用于治疗靶向治疗失败的VHL（+）CCRCC患者的治疗。因此我们推断miR-204可能是非VHL突变的CCRCC中起到促癌的作用，并可以作为一个潜在的治疗靶点。但其具体作用的通路正在进一步的研究中。