GAS5结合miR-135a-5p靶向FOXO1调控OHSS发生机制及预测OHSS价值的研究

Ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS) is the most common and potentially dangerous complication of assisted reproductive technology (ART) and the underlying mechanism is still unclear. It has been well established that elevated VEGF expression leads to an increase in vascular permeability and it is an important cause of OHSS. However, the role of LncRNA in the occurrence of OHSS is dismal. Then whether LncRNA may cause OHSS by regulating VEGF and what is the mechanism? Our previous results showed that LncRNA GAS5 was down-regulated in granulosa cells with OHSS high risk patients and GAS5 could bind to miR-135a-5p which can target to FOXO1 using sequencing and bioinformatics analysis. In addition, FOXO1 can regulate VEGF signal pathway. Based on the results we propose that GAS5 antagonizes its negative regulation of FOXO1 by binding to miR-135a-5p, activating and up-regulating VEGF expression and leading to OHSS. The aim of this project is to reveal the underlying mechanism of GAS5/miR-135a-5p/FOXO1 axis which regulates granulosa cell proliferation and apoptosis via VEGF signal pathway by means of cell, clinical and animal experiments, combined with lentivirus and siRNA. Our study may shed lights to provide scientific basis for early prediction and treatment target selection of OHSS.

卵巢过度刺激综合征（OHSS）是辅助生殖最具潜在危险的并发症，而导致其发生的机理仍不甚明确。VEGF表达上调导致血管通透性增加是OHSS发生的重要原因。而LncRNA在OHSS发生中的作用尚不明确。那LncRNA是否可能通过调控VEGF导致OHSS发生？机制是什么？前期结果显示：LncRNA GAS5在OHSS高风险患者颗粒细胞中显著下调，生信分析发现GAS5可以和miR-135a-5p结合并靶向FOXO1，而FOXO1调控VEGF通路已有文献报道。基于此我们提出科学假设：GAS5通过结合miR-135a-5p拮抗其对FOXO1的负调控作用，激活并上调VEGF表达并导致OHSS发生。本项目拟从细胞实验、临床及动物模型出发并结合慢病毒，siRNA等工具阐述GAS5/miR-135a-5p调控VEGF通路在颗粒细胞增殖及凋亡中功能和调控机制。从而为OHSS早期预测及治疗靶点选择提供科学依据。

卵巢过度刺激综合征（OHSS）是辅助生殖最具潜在危险的并发症，而导致其发生的机理仍不甚明确。而LncRNA在OHSS发生中的作用尚不明确。本研究通过分析 OHSS 高低风险患者卵巢颗粒细胞中 LncRNA 表达谱差异，筛选和鉴定参与调控 OHSS 发生的 LncRNA（GAS5）。通过构建稳定过表达及干扰 LncRNA GAS5 表达的慢病毒系统，在体外培养系统中探讨 LncRNA GAS5 调控卵巢颗粒细胞增殖与凋亡功能；结合针对与 GAS5 相结合的 miRNA（miR-135a-5p）表达的 mimics 和 inhibitor使用，以及 miR-135a-5p 靶点蛋白 FOXO1 小分子 RNA 干扰技术使用，在细胞水平阐述GAS5/miR-135a-5p/FOXO1调控网络的功能及其在OHSS发病过程中的分子机制。 GAS5是测序筛选中下调较为明显的LncRNA，而颗粒细胞临床样本验证结果证实GAS5的表达与测序结果相一致。通路富集的结果也提示差异表达的mRNA与细胞增殖、凋亡、炎症信号通路密切相关。（JARG：Fig1-5）该部分研究结果已经于2018年发表在《Journal of Assisted Reproduction and Genetics》上。GAS5可以抑制颗粒细胞系增殖，促进凋亡。GAS5可以直接与miR-135a-5p结合，并协同调控OHSS发病进程。miR-135a-5p可以靶向FOXO1的3’-UTR；过表达miR-135a-5p可以抑制FOXO1的基因及蛋白表达；影响下游的mTOR-AKT表达。研究结果正在整理发表中。PCOS患者血浆中GAS5表达水平明显下降，在PCOS合并IR的患者中GAS5表达水平降低更明显；并且GAS5表达与IR呈负相关关系（GE：Fig1-4，Table 1）。研究结果2018年发表在《Gynecological Endocrinology》上。.在既往的研究中，有部分研究是从miRNA 层面阐述OHSS 功能，但是针对分子机理的研究较少，而基于LncRNA 调控OHSS 的研究尚未见报道，本研究首次以LncRNA 作为切入点，探讨OHSS机理，是一种新的切入点，具有理论上的创新意义。本项目紧密结合OHSS临床和分子机制研究的最新进展，并紧扣当前研究热点，项目的完成进一步揭示OHSS的发生机制，为阻断甚