AMH信号通路在OHSS发生发展过程中作用机制的研究

Ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS)is a severe complication observed in some patients undergoing controlled ovarian hyperstimulation (COH) during assistened reproductive medicine,and its mechanism is unclear. Anti-Mullerian hormone (AMH) may play an inhibitory role in the development of follicles, including:1)inhibition of follicular activation and growth; 2)inhibition of FSH stimulated growth; 3)inhibition of GC growth; 4)and inhibition of aromatase. During our previous study, we found that SNP mutation exist in the AMH DNA. Thus, we presume that AMH signal pathway may play an important role during the nosogenesis of OHSS. To prove this hypothesis, we use molecular biologic technology, DNA sequencing and histochemical technology, observing the expression of AMH signal pathway in the GC of OHSS patient and the role of AMH signal pathway during the nosogenesis of OHSS. By this study, we can understand the nosogenesis of OHSS more clear, and this study may provide us a new theory and target to prevent and cure OHSS.

卵巢过度刺激综合征(OHSS)是辅助生殖技术中较严重的一种并发症，其发病机制目前尚不清楚。抗苗勒氏管激素（AMH）能够抑制始基卵泡的活化和发育，降低卵泡对FSH的敏感性、抑制颗粒细胞生长，抑制颗粒细胞中芳香化酶活性。AMH信号传导通路是卵泡发育的抑制机制之一。前期研究中，我们发现OHSS患者的AMH基因存在SNP突变。因此，我们推测AMH信号传导通路在OHSS发生发展过程中发挥了重要的作用。为证明这种假说，本实验应用分子生物学、基因测序、组织化学等技术，探讨AMH信号通路各个环节在OHSS患者颗粒细胞中的表达规律及其在OHSS发生发展过程中的作用和机制。本研究将从卵泡发育抑制机制异常的角度，进一步解释OHSS发生发展的分子机制，为寻求有效的OHSS防治方法提供新的理论依据和新的靶点。

卵巢过度刺激综合征（OHSS）是辅助生殖技术中较严重的一种并发症，其发病机制目前尚不清楚。抗苗勒氏管激素信号传导通路是卵泡发育的抑制机制之一。AMH能够抑制始基卵泡的活化和发育，降低卵泡对FSH的敏感性、抑制颗粒细胞生长，抑制颗粒细胞中芳香化酶活性。..研究内容.一、纳入了62名OHSS患者，60名非OHSS患者。对AMH的5个外显子和AMHR2的11个外显子进行直接测序，然后进行SNP突变分析，观察AMH/AMHR2的SNPs与OHSS发生的关系。.二、纳入83名OHSS患者，108名非OHSS患者，采集她们的单个卵泡液和GCs。通过ELISA法检测AMH及E2在单个卵泡液中的浓度，通过qRT-PCR法检测AMH、AMHR2及AMHR1在GCs中的表达，分析其对OHSS发生发展的影响。.三、使用AMHR2降调小鼠建立小鼠超促排卵模型，进一步验证AMH信号传导通路缺陷在OHSS发生、发展过程中的作用。..重要研究结果及数据.一、我们发现OHSS患者AMH外显子中存在7种SNPs，其中有2种SNPs为错意突变（rs10407022和rs182295886）。但是这两种错意突变均不会增加OHSS发病风险。在OHSS患者AMHR2外显子中我们没有发现SNPs。.二、通过研究，我们发现OHSS患者单个卵泡液中AMH浓度要显著低于对照组中的浓度，OHSS患者单个卵泡液中E2浓度显著高于对照组中的浓度。单个卵泡液中E2浓度与AMH浓度呈负相关，另外，卵泡液中AMH浓度与获卵数也呈负相关。.颗粒细胞中AMH mRNA几乎检测不到，而OHSS患者颗粒细胞中AMHR2 mRNA表达水平要显著低于对照组颗粒细胞中AMHR2 mRNA表达水平。AMHR1 （ALK2，ALK3，ALK6）mRNA在OHSS患者颗粒细胞中的表达与对照组无显著差异。.三、我们发现通过降调AMHR2的表达阻断AMH信号传导通路后，卵巢对外源性激素的反应显著增加，进而导致小鼠发生OHSS。..科学意义.一、我们首次对OHSS患者AMH/AMHR2外显子的SNPs进行了研究，研究结果说明AMH/AMHR2外显子的SNPs与OHSS的发生发展无明显相关性。.二、研究结果表明存在AMH信号传导缺陷的患者在COH过程中更易发生OHSS。AMH信号通路可作为以后研究和防治OHSS的新的靶点。