新分子MC3-Ag/Txl-2介导结肠癌细胞增殖和转移的功能及机制研究

结肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一。经典的肿瘤标志物如CEA、CA199等不足以用于早期诊断。MC3-Ag是本研究所应用淋巴细胞杂交瘤技术发现的新的结肠癌相关抗原。通过深入研究，发现它在结肠癌临床诊断及重组疫苗研制中具有重要价值。我们前期研究证实MC3-Ag为新分子Txl-2蛋白的二个选择性剪接体，并首次发现其在肿瘤中高表达，而关于该蛋白的功能在国际上尚未有文章报道。本课题将在上述工作基础上，用基因转染、RNAi技术、MTT实验、损伤刮擦实验、Transwell小室侵袭实验、流式细胞术、裸鼠体内模型等方法深入探讨MC3/Txl-2对结肠癌细胞增殖和侵袭转移的影响，通过激光共聚焦、免疫共沉淀、基因芯片、双向电泳等方法研究分子机制及各剪接体的功能差异。完成本课题将对揭示结肠癌发生发展机制、确定新的结肠癌基因治疗靶点具有重要意义，也将深入我们对于不同选择性剪接体发挥不同生物学功能的理解。

本项目进展顺利，达到预期目标。我们着重研究了Txl-2在结肠癌组织中的表达情况及其与临床病理参数、病人预后的关联性。接着，我们重点针对Txl-2促进结肠癌细胞侵袭转移这一表型，进行深入研究，特别阐明了Txl-2的三个选择性剪接体发挥的不同作用。最后，我们针对Txl-2促进侵袭转移的分子机制进行了深入探索，发现了与Txl-2相互作用的蛋白，部分阐明了其促进结肠癌细胞侵袭转移的分子机制。此外，我们还对Txl-2影响细胞增殖和凋亡进行了研究。我们发现Txl-2蛋白在结肠癌组织中高表达，而在正常肠粘膜组织相对缺失或低表达。Txl-2的表达和结肠癌患者的病理分期密切相关，且高表达患者预后不佳。发现下调Txl-2蛋白能够在体内体外抑制结肠癌细胞的侵袭转移能力。Txl-2的3种选择性剪接体在调控结肠癌恶性生物学行为中发挥不同作用。Txl-2b显著促进细胞迁移转移，Txl-2a对侵袭转移表型影响不显著，而Txl-2c负反馈调控抑制细胞侵袭转移。进一步酵母双杂交和免疫沉淀实验发现只有Txl-2b能够与小G蛋白家族分子Ran相互作用，揭示了其发挥主要促癌作用的分子基础。进一步发现PI3K信号通路参与了Txl-2b-Ran-MMP介导的结肠癌细胞侵袭转移。本研究为结直肠癌的诊治提供了新的候选标志物和分子靶点，同时为深入理解肿瘤特异的选择性剪接及其作用机制打开了新的视角。此外，我们还发现Txl-2b能够通过NF-kB通路促进细胞增殖，诱导凋亡抵抗。本项目顺利完成，共发表3篇SCI论文，其中最高影响因子8.456分。培养1名博士研究生和1名硕士研究生，均已顺利毕业。1名硕士研究生仍在培养中。卢瑗瑗同志作为主要工作完成人在2012年消化病大会青年论坛报道自己的工作，获得2等奖。