miR-126靶向血管内皮生长因子A调控胃癌恶性表型和血管新生的作用及其机制

血管新生为肿瘤建立了营养和氧的供给通道，使其获得恶性潜能。血管内皮生长因子A（VEGFA）是最强大的促血管新生因子。最新研究发现某些miRNA可调控血管生成，其中miR-126在生理性血管生长中发挥重要作用，未见报道其能否参与胃癌（GC）血管新生。我们对GC进行原位杂交检测发现miR-126表达明显下调，并与VEGFA表达负相关。综合运用软件行靶基因预测发现miR-126在VEGFA的3'UTR有多个互补位点。我们利用荧光素酶报告基因检测实验进一步鉴定了VEGFA为miR-126的靶基因。故我们合理推测miR-126可能参与GC的血管新生。本课题拟构建miR-126慢病毒表达载体和miR-126 LNA knockdown探针转染GC细胞，并进行裸鼠成瘤实验，检测VEGFA及其下游蛋白的表达变化并进行干预实验，评价GC恶性潜能的变化，明确miR-126对GC恶性表型和血管新生的作用和机制。

血管新生（angiogenesis）是新的血管的出芽，它是正常机体乃至恶性肿瘤生长必不可少的过程。现已发现较多的微小RNA（microRNA, miR）可以调控生理性或病理性血管新生的过程。miR-126 是内皮特异性微小RNA，在维持血管的完整性和调控血管的新生中发挥着重要的作用。目前，miR-126在胃癌血管新生的作用还不明了。 本研究拟明确miR-126对胃癌血管内皮生长因子A （Vascular endothelial growth factor-A, VEGFA）的调控作用及其对胃癌血管新生的影响，从而来初步探讨miR-126影响胃癌细胞恶性表型的作用和机制。通过RT-PCR检测miR-126在胃癌组织的表达发现，miR-126在胃癌组织中较正常胃粘膜表达明显下调。在胃癌组织中，miR-126的表达水平与肿瘤的微血管密度（microvessel density, MVD）及VEGF-A呈显著负相关。经生物信息学分析及荧光素酶报告实验证实，miR-126 可直接靶向结合于VEGF-A信使RNA的3-UTR，从而调控VEGF-A的表达水平。以促进miR-126表达的慢病毒Lenti-miR-126感染胃癌细胞 SGC-7901、MKN-28或MKN-45后，miR-126的表达水平明显上调，而VEGF-A及其下游靶蛋白ERK、Akt、mTOR、Bcl-2表达水平明显下调，同时伴有胃癌细胞凋亡的增加和细胞增殖受抑制。以抑制miR-126表达的慢病毒Lenti-anti-miR-126感染胃癌细胞 SGC-7901、MKN-28或MKN-45后，miR-126的表达水平明显下调，而VEGF-A及其下游靶蛋白ERK、Akt、mTOR、Bcl-2表达水平明显上调，同时伴有胃癌细胞凋亡的抑制和细胞增殖增加。通过原位移植瘤裸鼠成瘤实验证实，上调miR-126的表达可抑制VEGF-A的表达，同时可降低肿瘤组织的微血管密度并抑制肿瘤的生长。下调miR-126的表达可促进VEGF-A的表达，同时可增加肿瘤组织的微血管密度并促进肿瘤的生长。本研究提示miR-126可通过靶向调控VEGF-A抑制胃癌的生长和血管新生，它是一个新的胃癌治疗的潜在靶点。