雄激素调控ANKH在男性强直性脊柱炎发病中的作用及其相关机制研究

强直性脊柱炎（AS）的发病率男性数倍于女性, 多在15～30岁发病，即青春发育晚期以及性成熟期,且严重程度明显高于女性，相关的分子机制尚不清楚。前期研究中，我们观察到男性患者成纤维细胞用雄激素干预后，其ANKH的转录水平明显下调，结合国内外学者的研究成果，推断出：雄激素通过调控ANKH参与AS的发病过程。本课题采用不同的动物模型，选用转基因动物、模式动物以及患者成纤维细胞，采取活体动物去势，去势后雄激素体内注射，体外培养患者成纤维细胞后雄激素干预等措施，运用组织化学、Real-time PCR、免疫荧光、western-blot、慢病毒介导的基因过表达，RNAi等各种实验技术，检测ANKH的表达水平，评估局部组织钙化程度。从多个角度系统地探讨雄激素对"ANKH"基因的调控以及调控所引起的病理结果，明确其在AS发病过程中所起的作用及其相关机制，为AS的防治开拓新思路和提供新的药物靶点。

强直性脊柱炎（AS）的发病率男性数倍于女性, 多在15～30岁发病，即青春发育晚期以及性成熟期,且严重程度明显高于女性，相关的分子机制尚不清楚。前期研究中，我们观察到男性患者成纤维细胞用雄 激素干预后，其ANKH的转录水平明显下调，结合国内外学者的研究成果，推断出：雄激素通过调控ANKH参与AS的发病过程。本课题采用不同的动物模型，选用转基因动物、模式动物以及患者成纤维细胞，采取活体动物去势，去势后雄激素体内注射，体外培养患者成纤维细胞后雄激素干预等措施，运用组织化学、Real-time PCR、免疫荧光、western-blot、慢病毒介导的基因过表达，RNAi等各种实验技术，检测ANKH的表达水平，评估局部组织钙化程度。告知同意后术中取材，体外培养AS患者不同部位的成纤维细胞（包括滑膜、关节囊、前纵韧带、后纵韧带、纤维环等），在不同睾酮浓度的培养液中培养（分为加入雄激素受体的抗体封闭受体和不加抗 体两组），采用Real-time PCR、western-blot、免疫荧光等技术，监测这些AS患者成纤维细胞“ANKH”基因表达水平、表达“ANKH”基因的成纤维细胞的比例等。AS患者韧带异位骨化起始于关节韧带附着点处，且韧带骨化组织间存在较大量的成纤维细胞。AS患者的韧带组织中ANKH蛋白表达较少，ANKH蛋白可能在AS患者韧带组织的异位成骨过程中起到重要作用。体外培养条件下，AS患者韧带成纤维细胞的成骨趋势强于正常人，即成骨矿化能力更强，表明AS患者异位骨化与成纤维细胞的成骨分化存在某种关联。AS患者成纤维细胞的ANKH基因表达明显低于正常人，表明其可能参与AS患者韧带组织的异位骨化形成。