Id-1介导雄激素受体在男性乙肝相关性肝癌成瘤过程中作用的研究

乙肝相关性肝癌患者男女性比例大约为2-4:1，造成该现象的原因不明确。在肝癌组织中雄激素受体（AR）表达高于正常肝组织。AR阳性肝癌患者的预后较差，高水平的雄激素可促进肝癌发生，具体作用机制不明确。我们发现分化抑制因子-1（Id-1）是肝癌的潜在预后分子，与HBx关系密切，并促进肝癌形成。在肝癌发展过程中，HBx可增强AR活性，介导AR的高表达，促进雄激素依赖模式里肝癌的发生。在肝癌中，尽管尚无Id-1与AR相关性的报道，但在前列腺癌等其它恶性肿瘤中Id-1与AR关系密切。我们研究发现，稳定转染HBx的肝癌细胞中AR蛋白表达明显升高，当Id-1的表达被沉默后，AR的表达又显著降低。那么Id-1沉默所介导的AR表达降低，是否影响HBx对AR的正性转录调节，从而促进男性HBV感染者肝癌的成瘤过程，本课题拟对此进行深入研究。

本课题组验证了154例乙肝相关性肝癌患者组织中雄激素受体（AR）、分化抑制因子1（Id1）的表达情况，二者在肝癌细胞中均有阳性表达，且染色强度存在明显相关性。Id1的表达强度与患者的高血清HBsAg（＞200 s/n），伴门静脉侵犯，伴淋巴结转移，Child-Pugh B/C级，肿瘤低/中分化等临床表现密切相关（P<0.05）。AR的表达强度与高血清HBsAg（＞200 s/n），伴门静脉侵犯，肿瘤低/中分化等相关（P<0.05）。AR高表达组和AR低表达组之间总生存时间和无瘤生存时间均有显著差异，低表达组较高表达组有更长的生存期。Id1和AR的表达水平影响肝癌患者的无瘤生存时间。课题组发现在高转移潜能的HCC细胞系（MHCC-97H, LM3等）中AR表达水平较低转移潜能细胞系（HepG2，SMMC7721等）更高，而抑制AR表达后，其迁移和侵袭能力显著降低。在侵袭、转移水平相对较低的MHCC-97L细胞系中提高AR的表达水平，可显著提高细胞的迁移和侵袭能力。采用AR的激动剂和抑制剂作用于细胞系也能取得相同的效果。在AR激动剂增强AR表达过程中，我们发现Id1蛋白的表达也增强，并随着作用时间延长而增强。采用Id1干扰慢病毒载体抑制Id1的表达后，AR激动剂对肝癌细胞系迁移和侵袭能力的促进作用也减弱。裸鼠成瘤实验也验证了Id1在AR促进肝癌形成过程中起到重要作用。我们还对干扰Id1前后的肝癌细胞系进行了差异基因的检测，并进行了GO分析，有1817个基因出现显著变化，主要集中在与细胞增殖、粘附、凋亡和周期相关的分子信号及通路中。我们结合文献分析，对其中部分差异表达较为显著的基因进行进一步研究，发现CD44和NEDD9分子在AR通过Id1相关通路促进肝癌发生过程中起重要作用，是下一步的研究重点。项目研究基本按计划进行，紧跟国际前沿进行了局部相应调整。