地黄饮子对Aβ诱导的RAGE-MAPK信号通路的影响

We first study the mechanism of Dihuangyinzi in the RAGE-mediated MAPK singaling pathways and prevention and treatment of Alzheimer's disease (AD)with traditional Chinese medicine. We explore on the mechanism of treatment of AD with dihuangyinzi through new AD therapeutic strategiess-inhibiting expression of RAGE and adjusting their downstream MAPK pathways. By choosing internationally recognized APP695V717I transgenic AD mouse model and SH-SY5Y induced by Aβ1-42,we study on effect of dihuangyinzi on RAGE-MAPK signal pathway. We research the new targeting on prevention and treatment of AD and mechanism of antioxidation system in the treatment of AD with dihuangyinzi.We try to reveal biological basis on preventing AD by the method of tonifying kidney effects of dihuangyinzi.Besides, we provide the basis for the new drug development study on treating and preventing AD with dihuangyinzi.

1996年首次提出RAGE与Aβ结合激活多条信号传导通路，导致脑内氧化应激、炎症反应及Aβ过度生成，最终导致认知功能障碍。我们前期工作证实地黄饮子（DHYZ）通过调节氧化应激、NF-κB及炎症因子等方面防治AD，因此我们提出DHYZ抗氧化作用是否是通过RAGE与Aβ结合→激活ROS→启动MAPK(P38/ERK/JNK）信号转导→激活NF-κβ级联反应？本课题采用Aβ1-42诱导SH-SY5Y和APP695V717I转基因小鼠模型，检测RAGE、ROS、NF-kB含量，ERK1/2、p38、JNK及其磷酸化蛋白等指标，探讨DHYZ对RAGE介导氧化应激轴及其下游MAPK信号通路影响。本课题在国内首次从AD新的治疗策略--RAGE介导MAPK信号通路为切入点，深入系统研究DHYZ防治AD抗氧化作用分子靶点，同时揭示补肾填精法防治AD生物学基础，并对防治AD经典方DHYZ新药开发研究提供依据。

1996年首次提出RAGE与Aβ结合激活多条信号传导通路，导致脑内氧化应激、炎症反应及Aβ过度生成，最终导致认知功能障碍。我们前期工作证实地黄饮子通过调节氧化应激、NF-κB及炎症因子等方面防治AD，因此我们提出DHYZ抗氧化作用是否是通过RAGE与Aβ结合→激活ROS→启动P38MAPK信号转导→激活NF-κβ级联反应？ . 研究证实：地黄饮子含药血清可以促进SH-SY5Y细胞的生长，具有保护作用，且最佳浓度为10%，作用时间为24h。Aβ1-42寡聚体可以成功诱导SH-SY5Y细胞损伤从而制备AD体外模型，且最佳作用浓度为5μmol/L，作用时间为24h。地黄饮子可以通过抑制ROS的产生，发挥抗氧化作用，进而抑制细胞凋亡率来防治阿尔茨海默病。地黄饮子能降低SH-SY5Y细胞RAGE过表达，抑制细胞ROS生成，抑制细胞凋亡率，降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-a的水平，下调NF-κBp65蛋白、磷酸化的p38蛋白水平。地黄饮子对不同时间点的p38磷酸化水平的变化有干预。综上，地黄饮子能降低SH-SY5Y细胞RAGE蛋白过表达，抑制ROS的生成，下调p38磷酸化水平，抑制细胞凋亡，减轻炎性反应，可能通过下调Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞RAGE-p38MAPK信号通路起到保护作用。基于体外实验，我们进一步证实地黄饮子组可以改善APP/PS1双转基因小鼠空间探索记忆能力，并且地黄饮子可能是通过抑制APP/PS1小鼠脑组织ROS产生和Aβ1-42蛋白，下调皮层和海马RAGEmRNA和蛋白，及下调磷酸化p38蛋白，抑制细胞凋亡，减轻炎症反应，综上可见地黄饮子可能通过下调APP/PS1双转基因小鼠脑组织RAGE介导p38MAPK信号通路改善学习记忆能力。. 本课题在国内首次从AD新的治疗策略----RAGE介导P38MAPK信号通路为切入点，深入系统研究地黄饮子防治AD抗氧化作用分子靶点，同时揭示补肾填精法防治AD生物学基础，并对防治AD经典方DHYZ新药开发研究提供依据。