地黄饮子对转Tau基因果蝇阿尔茨海默病模型mTOR信号通路基因表达的影响

阿尔茨海默病（AD）是最常见的神经退行性疾病，我国目前至少有400万-500万病人，且每年增加数十万新病人，目前没有理想的治疗药物。本课题在前期工作基础上，以能够影响神经元的发育，抑制细胞凋亡，保护神经系统的mTOR信号转导系统为切入点，探讨地黄饮子对细胞凋亡抑制作用和神经系统的保护作用，及防治AD的作用机理。本课题在国内应用转Tau基因的果蝇AD模型, 采用实时荧光定量法检测mTOR信号通路中基因的表达，寻找药物的多基因作用位点及其对基因网络的调控作用，通过观察地黄饮子对mTOR信号通路因基因表达的影响，进一步探讨mTOR信号通路与AD的关系，及AD的发病机制和治疗靶点，揭示地黄饮子补肾化痰、开窍醒神法防治老年性痴呆的内在机理，为进一步开展地黄饮子物质基础与药效、作用机理相关性研究奠定基础，对治疗AD的经典方地黄饮子新药开发研究提供依据。

目的：探讨地黄饮子对能影响神经元的发育，抑制细胞凋亡，保护神经系统的mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR、4E-BP和P70S6K基因表达的影响，探讨地黄饮子对神经系统保护作用，及防治阿尔茨海默病的药物疗效和作用机理。.方法：将果蝇分为三组，即空白组、地黄组、模型组，空白组为正常CS果蝇喂普通培养基，地黄组为转tau基因果蝇喂2%浓度地黄饮子培养基，模型组为转tau基因果蝇喂普通培养基，均喂养5天。对果蝇的攀附指数，半数死亡时间，平均寿命，最高寿命，进入无障碍离心管数量进行比较；运用实时荧光定量PCR法检测地黄饮子对转tau基因果蝇PI3K、AKT、mTOR、4E-BP和P70S6K mRNA表达的影响，运用Werstern Blot法检测地黄饮子对转tau基因果蝇PI3K、AKT、mTOR、4E-BP和P70S6K蛋白表达的影响。.结果：1. 同样喂养天数的情况下，给予2%浓度的地黄饮子使转Tau基因雄性果蝇模型的攀爬指数最高（P<0.05）；以2%浓度的地黄饮子分别喂养1d、3d、5d、7d天数后测试果蝇的攀爬能力，发现喂养时间为5d的实验组果蝇攀爬指数最高（P<0.05）。2行为学测试结果显示与模型组比较，地黄组果蝇攀附指数，半数死亡时间，平均寿命，最高寿命，进入无障碍离心管数量明显提高，且有显著性差异。3与模型组相比，地黄饮子可使转tau基因果蝇PI3K、AKT、mTOR mRNA表达增加，且有显著性差异；与模型组相比，地黄饮子可使转tau基因果蝇PI3K、AKT、mTOR蛋白表达增加，且有显著性差异。4地黄饮子能够下调mTOR信号通路的表达，降低4E-BP和P70S6K的mRNA和蛋白的表达，且均具有统计学意义。.结论：1地黄饮子可以改善转Tau基因果蝇学习记忆能力，提高其寿命，增强其嗅觉记忆能力，保护神经系统；2地黄饮子可上调转tau基因果蝇PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白的表达；3地黄饮子可下调4E-BP和P70S6K的mRNA和蛋白的表达，减弱了对蛋白质生物合成的抑制作用，为蛋白质的大量合成奠定基础，调节了细胞周期，抑制了细胞的凋亡，从而起到防治AD的作用。