马兜铃酸肾毒性基因靶点的研究

申请者拟在日本明治大学博士论文研究工作的基础上,选择关木通中毒性较强的马兜铃酸为代表，培养小鼠肾小管上皮细胞，建立含有药物血凊的马兜铃酸肾病细胞模型；以其所致肾间质纤维化过程中最关键的纤维化因子- - 转化生长因子β1（TGF-β1）的细胞内信号负调控蛋白（Smad7）为工具，利用已建立的小鼠cDNA文库，采用RT-PCR技术、凝胶电泳和DNA测序技术，通过对Smad7以及波形蛋白、Smad4和TGF-β1在马兜铃酸肾病细胞模型中基因表达的观察，深入探讨马兜铃酸肾毒性作用的基因靶点；凝胶电泳分离纯化实验组中Smad7并进行DNA测序，同genbank正常基因序列比较，得出基因差异片段;并提取、标记基因差异片段，以此构建载体，制备模板。该模板作为药物肾毒性的筛选工具有很好的应用前景。本研究为中草药基因水平上毒性作用机制研究提供新的实验方法，也为新药开发、基因遮蔽或剔除等修复治疗提供实验依据。