青藤碱抑制高迁移率族蛋白B1表达的分子机制及意义

中药青藤碱具有抗炎、免疫抑制等药理作用，但其作用机制有待深入研究。高迁移率族蛋白B1是一种关键炎症介质，与多种急慢性炎症(包括自身免疫性疾病)的发生发展密切相关，已成为抗炎治疗的新靶点。关于青藤碱是否通过抑制HMGB1表达而发挥抗炎、免疫抑制作用目前未见报道。我们前期研究证实，青藤碱可下调人 HMGB1表达，并能抑制其基因启动子活性，但其下调具体机制尚不清楚。我们推测其下调可能与青藤碱影响了作用于HMGB1基因启动子的转录因子有关。为证实该推测，本项目拟借助生物信息学分析、荧光素酶报告基因检测、EMSA、Super EMSA、ChIP等技术，解析青藤碱抑制HMGB1表达的分子机制；进而在正常及急、慢性炎症动物模型中证实，在体情况下青藤碱可下调HMGB1并能缓解疾病病情。本项目旨在揭示青藤碱下调HMGB1表达的分子机制及其在抗炎、免疫抑制中的意义，为深入阐明青藤碱抗炎、免疫抑制机制提供依据。

中药单体青藤碱有明确的抗炎、免疫抑制等药理作用，HMGB1是一种关键炎症介质，与多种急慢性炎症(包括自身免疫性疾病)的发生发展密切相关，已成为抗炎治疗的新靶点。本项目以HMGB1为切入点，在证实青藤碱可下调人 HMGB1表达，并能抑制其基因启动子活性的基础上，借助生物信息学分析、荧光素酶报告基因检测、EMSA、Super EMSA、ChIP等技术，解析青藤碱抑制HMGB1表达的分子机制。我们的研究结果显示：1、青藤碱通过降低C/EBPβ下调LPS诱导的HMGB1表达。 2、青藤碱下调LPS诱导的HMGB1表达与该基因启动子区域-1035～-1022的C/EBP结合位点密切相关。3、青藤碱可降低小鼠LPS内毒素血症模型血清中的HMGB1，TNF-α、IL-6等相关炎症细胞因子亦减少。此外，我们还证实了青藤碱可通过ERK通路诱导内皮细胞自噬，该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的另一机制。同时，由于单独的HMGB1 A box已成为公认的HMGB1抑制剂，我们制备了基于人HMGB1 A box和酸性尾端组成的新型衍生分子，并证实该衍生分子体内具有较好的抗炎活性，尾静脉注射为较有效的给药方式，能在小鼠多个组织器官中广泛分布，体内代谢呈二室模型。本研究对青藤碱抑制HMGB1表达的分子机制进行详细解析，为以HMGB1为靶点的相关炎性、免疫性疾病的治疗提供了新的思路。